Plasmidos 1

“CURACIÓN Y SEGREGACIÓN DE PLÁSMIDOS EN E. COLI”
INTRODUCCIÓN
Los plásmidos son elementos genéticos extra cromosómicos que se han encontrado esencialmente en todos los tipos de bacterias estudiadas hasta la fecha. Dependiendo de su tamaño pueden codificar desde unas cuantas proteínas hasta cientos de ellas. Sin embargo, raramente codifican productos esenciales para el crecimiento celular,tales como RNA polimerasas o enzimas del ciclo de los ácidos tricarboxílicos. En cambio, los productos de sus genes generalmente dan a las bacterias una ventaja selectiva sólo bajo ciertas condiciones. La resistencia a antibióticos como la ampicilina, tetraciclina y kanamicina; la nodulación de raíces de leguminosas; y la producción de antibióticos como la bacteriocina son algunas característicasfenotípicas codificadas por los plásmidos.
Los plásmidos varían ampliamente en tamaño, desde miles a cientos de miles de pares de bases y son, con mayor frecuencia, moléculas circulares de DNA de doble cadena. Sin embargo, algunas bacterias poseen plásmidos de estructura lineal. Estos elementos juegan un papel crucial en la evolución y adaptación bacterianas, ya que son mediadores del intercambiode material genético entre estas poblaciones.
En cuanto al tamaño, existe una amplia gama: desde plásmidos muy pequeños (de unas 2 kb) hasta plásmidos muy grandes (ciertos plásmidos de Pseudomonas tienen 500 kb). Incluso existen “megaplásmidos” en ciertos Rhizobium que llegan a tener 1600 kb.
Cada tipo de plásmido tiene un número medio de copias por célula característico. Por regla general, losgrandes plásmidos tienen una o dos copias por célula (plásmidos con control estricto de la replicación), mientras que los pequeños suelen estar presentes como varias copias (>10), denominándose plásmidos de control relajado.
En función de que los plásmidos sean o no transmisibles de una bacteria a otra por medio de contactos intercelulares, se pueden distinguir:
Plásmidos conjugativos(autotransmisibles), que son aquellos que se transfieren entre cepas por medio de fenómenos de conjugación. Algunos de estos plásmidos no sólo se transfieren entre cepas de la misma especie, sino que son capaces de hacerlo entre especies y géneros muy diversos, recibiendo el muy apropiado nombre de plásmidos promiscuos o de amplio espectro de hospedadores, permitiendo transferencia horizontal deinformación genética entre grupos bacterianos filogenéticamente alejados.
Plásmidos no conjugativos, carentes de esta propiedad de conjugación. Dentro de esta categoría existe un subgrupo, el de los plásmidos movilizables: son aquellos no autotransmisibles que pueden ser transferidos por la acción de un plásmido conjugativo coexistente en la misma bacteria.
OBJETIVOS
Demostrar la pérdida espontáneade DNA plasmídico en cepas de E. coli.
Demostrar la pérdida inducida de plásmidos en las cepas de E. coli.
Comparar el comportamiento de un plásmido grande unicopia con el de un plásmido pequeño multicopia en relación a su curación.
Comparar el efecto curante de dos agentes químicos de diferente naturaleza sobre Escherichia coli.
RESULTADOS
Tabla 1. Título y porcentaje de sobrevivencia decepas de Escherichia coli tratadas con anaranjado de acridina 1 mg/mL.
Cepa de Escherichia coli Equipo TESTIGO PROBLEMA % Sobrevivencia
Dilución No. Colonias UFC/ml Dilución No. Colonias UFC/ml DH5α pBS 7 1x10-5 385 3.85x108 1x10-5 268 2.68x108 69.61
9 1x10-5 297 2.97x108 1x10-5 130 1.3x108 43.77
11 1x10-5 369 3.69x108 1x10-5 97 9.7x107 26.28
JC4046 7 1x10-5 119 1.19x108 1x10-5 100 1x108 84.03
91x10-6 89 8.9x108 1x10-6 79 7.9x108 88.76
11 1x10-5 322 3.22x108 1x10-5 120 1.20x108 37.26
La tabla 1 muestra el porcentaje de sobrevivencia para la Escherichia coli de diferentes cepas, se entiende como sobrevivencia al porcentaje de células viables desarrolladas en el medio después de que a éstas se les haya sometido con un tratamiento que afecte su crecimiento en dicho medio, en este caso...