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APUNTES DEL TEMA 4
Tinción de Gram,
Consiste en método de identificación de bacterias mediante una tinción específica. Fuedesarrollado por el médico danés Hans Christian Joachim Gram, convirtiéndose en unprocedimiento utilizado universalmente.
Procedimiento: En un primer momento las bacterias se tiñen con violeta de genciana(derivado metilado anilínico) y después se tratan con la solución deGram (1 parte deyodo, 2 partes de yoduro potásico y 300 partes de agua); por último se lavan con alcoholetílico.
El resultado es que unas bacterias retienen el fuerte color azul de la violeta de gencianay otras se decoloran por completo. A veces se añade una contratinción con fucsina o eosina para teñir las bacterias decoloradas de color rojo y hacerlas más visibles.
Se denominan bacterias Grampositivas a aquellas que retienen la tinción azul y bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias presentan capacidad variable de tinción de Gram y se llaman Gram variables. Bacterias Grampositivas típicas son los estafilococos que producen forúnculos; Gram negativas representativas son la Escherichia coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos ferina;
Gramvariables son los bacilos de Koch de la tuberculosis.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.
La pared de la célula bacteriana sirve para dar su tamaño y forma al organismo así como para prevenir la lisis osmótica.
El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es elpeptidoglicano.
La pared de la célula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano así como algo de ácido teicoico.
Generalmente, 80%-90% de la pared de la célula gram-positiva es peptidoglicano.
La pared de la célula gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho más delgada, únicamente de peptidoglicano y está rodeada por una membrana exteriorcompuesta de fosfolípidos, lipopolisacáridos, y lipoproteínas.
Sólo 10% - 20% de la pared de la célula gramnegativa es peptidoglicano.
Por otra parte, entre los constituyentes de la pared celular de las bacterias Grampositivasy Gram-negativas existen importantes diferencias. Por ejemplo
las paredes de las bacterias gram-positivas contienen menos aminoácidos que las gram-negativas
el contenidograso es mucho más elevado en las gram-negativas que en las gram-positivas. Este hecho se ha propuesto como explicación del mecanismo de la reacción al gram


Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés (Polymerase Chain Reaction), es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis,1 cuyoobjetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.
Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad,identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.
Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que vuelvan a unirse lashebras de ADN para que vuelvan a duplicarlas.
La reacción en cadena de la polimerasa fue perfeccionada por Kary Mullis perteneciente ala Cetus Corporation en California SA, en la década de 1980.
Inicialmente la técnica era lenta, ya que las polimerasas se desnaturalizaban al realizar loscambios de temperatura y era necesario agregar nuevas polimerasas en cada ciclo.
Puesto que las temperaturas...