Polimorfimos
Laboratorio de Biología Molecular
Departamento de Laboratorios Clínicos
Facultad de Medicina
Pontificia Universidad Católica de Chile
DIAGNOSTICO RAPIDO DE ANEUPLOIDIAS DE LOS CROMOSOMAS 13, 18, 21 y SEXUALES EN LIQUIDO AMNIOTICO Y EN SANGRE PERIFERICA DE RECIEN NACIDOS UTILIZANDO LAS TECNICAS DE FISH Y PCR FLUORESCENTE
FELIPE IGNACIO ARANIS AQUEVEQUEDirector de tesis: Dra. Marcela Lagos Lucero
Mayo 2010
Memoria Profesional entregada a la Facultad de Ciencias Biológicas de la Pontificia Universidad Católica de Chile, en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Bioquímico
AGRADECIMIENTOS
En primer lugar, quiero agradecer al Laboratorio de Biología Molecular del Departamento de Laboratorios Clínicos dela Facultad de Medicina de la Pontificia Universidad Católica de Chile, por haberme permitido desarrollar este proyecto, aportando con toda la infraestructura y recursos necesarios.
Muchas gracias a la Dra. Marcela Lagos por aportar con toda su experiencia y conocimiento, además de la confianza y apoyo en mi persona. No puedo dejar de destacar y agradecer a la BQ Helena Poggi, quien meaconsejó y supervisó, no sólo en el ámbito técnico-profesional, sino también en el ámbito personal.
También quiero agradecer a todo el personal del laboratorio por haberme acogido, entendido y tolerado durante más de un año. Especiales agradecimientos a las TM Eliana Romeo, Gloria Mella y Mónica Abarca, por toda la paciencia que tuvieron conmigo y por todos los acertados consejos yenseñanzas que obtuve de ellas. Además, doy gracias al Biólogo Eduardo de la Rosa, por su contribución en la confección de este trabajo.
Es innegable todo el aporte efectuado por el Lic. Diego Gutiérrez, quien siempre aportó con consejos muy acertados y con la cuota de humor que siempre se agradece en un trabajo como éste. Además, quiero destacar al Lic. Patricio Mujica, por su importantecontribución bibliográfica.
INDICE DE MATERIAS
AGRADECIMIENTOS ii
INDICE DE MATERIAS iii
INDICE DE TABLAS vi
INDICE DE FIGURAS vii
NOMENCLATURA viii
RESUMEN x
ABSTRACT xi
INTRODUCCION 1
OBJETIVOS 9
Objetivo general 9
Objetivosespecíficos 9
MATERIALES 10
Extracción de ADN 10
Amplificación de STR 10
Electroforesis capilar con detección fluorescente 12
Análisis de los productos de PCR 13
Disgregación de líquidos amnióticos 13
FISH 14
METODOS 16
Obtención de muestras 16
Almacenamientode muestras 16
Extracción de ADN 17
Cuantificación de ADN 17
Amplificación de STR 18
Electroforesis capilar con detección fluorescente 20
Análisis e interpretación de resultados de PCR 20
Determinación de la utilidad de los marcadores del kit AneufastTM 21
Preparación y almacenamiento de soluciones para disgregación y FISH21
Disgregación de líquidos amnióticos 24
FISH 26
Análisis e interpretación de resultados FISH 31
RESULTADOS 32
Estandarización de protocolo para QF-PCR 32
Análisis de muestras clínicas por QF-PCR 43
Utilidad de los marcadores utilizados en QF-PCR 45
Estandarización de protocolo para FISH 47Análisis de muestras clínicas por FISH 52
DISCUSION 55
CONCLUSIONES 63
BIBIOGRAFIA 64
INDICE DE TABLAS
TABLA I: Marcadores incluidos en el kit AneufastTM 11
TABLA II: Sondas incorporadas en el kit Aneuvysion® (Vysis) 14
TABLA III: Distribución de los partidores en cada mezcla
de reacción del kit AneufastTM...
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