POLIMORFISMOS ADN

IDENTIFICACIÓN DE POLIMORFISMOS ADN
ANÁLISIS POBLACIONAL

IDENTIFICACIÓN DE POLIMORFISMOS ADN: ANÁLISIS
POBLACIONAL
INTRUDUCCIÓN
En el ámbito de la antropología molecular se utiliza el análisis de los
polimorfismos ADN con diferentes objetivos, uno de los cuales es el análisis
poblacional. Con este fin se pueden utilizar diferentes tipos de polimorfismos
ADN tanto mitocondrial como nuclear.Dentro del ADN nuclear, en la actualidad uno de los polimorfismos más
informativos e interesantes es el polimorfismo de secuencia Alu.
Cada una de estas secuencias Alu tiene una longitud de unas 300 pares
de bases y se considera que su inserción tuvo lugar en los primates hace
aproximadamente 65 millones de años, dispersándose posteriormente en el
genoma de los primates.
Estas secuencias constituyenlos elementos móviles del genoma más
abundantes en los primates y de la especie humana en particular.
En la especie humana existen más de 500000 copias por genoma
haploide de secuencias Alu, lo cual supone más del 5% de genoma nuclear
humano. Esta sorprendente abundancia y el hecho de estar restringida a los
primates le confiere una especial singularidad de modo que el estudio de su
polimorfismo esfundamental para estudiar la evolución genética de los
primates, para la caracterización de las poblaciones y en definitiva para el
estudio de la evolución de la especie humana.
El polimorfismo viene dado por el hecho de que las inserciones más
recientes no están fijadas, de modo que en la actualidad existen cromosomas
portadores de la inserción Alu en un determinado locus y cromosomas que nollevan la inserción.
Esta situación se puede asumir a un mecanismo genético de un locus
con dos alelos y daría lugar a tres tipos de individuos:
• Individuos homocigotos (++), en los que ambos cromosomas llevarían
inserción.
• Individuos heterocigotos (+-), en los que sólo uno de los cromosomas
llevaría inserción.
• Individuos homocigotos (--), en los que ambos cromosomas carecerían
de la inserción.PRÁCTICA
Vamos a estudiar la inserción Alu TPA25, que se encuentra en el brazo
del cromosoma 8.
La metodología para la identificación de estos polimorfismos se divide
en:
1.- Extracción y purificación del ADN
2.- Amplificación vía PCR
3.- Identificación de los fragmentos de ADN

1.- EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DEL ADN
La extracción se puede llevar a cabo en cualquier tejido pero el idóneo
es lasangre.
Se basa en la lisis celular, que se puede hacer con diferentes métodos
según el polimorfismo que se quiera estudiar. En esta práctica utilizamos
solución de lisis RBC.
Procedemos del siguiente modo:
Lisis de eritrocitos (RCB): mezclamos las muestras de buffi coat (muestras
323 y 326) con el tampón de lisis y agitamos. Centrifugamos, desechamos el
sobrenadante y nos quedamos con el pellet quecontiene el ADN (dejamos un
poco de sobrenadante para resuspender el ADN).
Extracción: resuspendemos los leucocitos con el ADN residual en el
vortex, añadimos la solución de extracción y volvemos a mezclar en el vortex.
Retención del ADN en la columna: hacemos pasar la mezcla a través de
una columna GFX, la cual contiene una resina que retiene el ADN.
Centrifugamos para obligar a la solución apasar a través de la resina y para
que los elementos que no sean ADN se separen lo más posible.
Lavado: tenemos el ADN retenido en la columna pero todavía pueden
existir elementos no deseables, por lo que hacemos pasar una solución de
extracción a través de la columna y a continuación añadimos una solución de
lavado, cuya misión es igualmente extraer de la columna todo lo que no sea
ADN.
Elución:añadimos agua miliQ a la columna que lo que hace es soltar el
ADN. Centrifugamos para acelerar el proceso.
De este modo lo que obtenemos es el ADN purificado en un tubo
eppendorf.

2.- AMPLIFICACIÓN VÍA PCR
Consta de tres pasos: desnaturalización, anillamiento y extensión.
En estos tres pasos intervienen dos factores importantes que son la
temperatura y el tiempo de exposición del ADN a esa...