Poster molecular

Detección de influenzavirus H5N1 con capacidad resistente a antibióticos
Daniela Cepeda, Valentina Salinas, Universidad Andrés Bello, Seminario Biología Molecular
Resumen
La cepa ha sido llamada HPAI A/H5N1 debido a la alta letalidad y virulencia del virus HPAI A/H5N1, su presencia endémica, el creciente número de organismos hospedadores y a su capacidad de sufrir mutaciones significativas, elvirus se ha convertido en la mayor amenaza de pandemia a nivel mundial. El material genético se compone por una sola cadena lineal de ARN, de sentido negativo (es decir, de sentido contrario o complementaria al ARNm que se sintetizará), dividida en 8 segmentos que contienen la información de 10 genes. Cada segmento se encuentra protegido por una nucleocápside, formada estructuralmente por unsegmento de ARN, varias moléculas de nucleoproteínas, y el complejo ARN polimerasa más enzimas asociadas necesarias para la síntesis del ARNm viral. Antibióticos (zanamivir y oseltamivir) tienen como diana principal la NA, intentando inhibirla. Esto impediría la propagación de los viriones y su unión al mucus, engañando al virión. Inhibidores de M2 son otra clase de medicamentos que incluyenamantadina y rimantadina lo que la membrana se presenta de color amarillo y la capa de proteína m1 en azul. Se indica las locaciones de las proteínas asociadas a la membrana (HA, NA, M1, M2, NS2) en el interior de la partícula se muestran las 8 distintas RNAs virales cada una de ellas compuestas por una molécula RNA asociada a la polimerasa viral (complejo de proteínas PB1, PB2, PA) y a un numero demonómeros de la nucleoproteína(NP).(Derecha) imagen de una partícula viral al observarla por microscopia electrónica de transmisión tras tinción negativa.

Procedimiento
Al encontrar el gen del virus, se extraen células HEK infectadas de la carne de pollo las cuales se plaquean en 3 placas con:  Droga 1 : zanamivir y oseltamivir  Droga 2: amantadina y rimantadina  Droga 3: droga 1 y 2 Estas sonincubadas en el periodo de una semana a una temperatura de 37ºC. Al pasar el tiempo necesario se realizo nuevamente un RT PCR de las células que no sobrevivieron a los distintos tipos de drogas (grafico 1) debido a que el virus muto en diferentes condiciones llevando a la célula a la muerte.
Sobrevivencia

6 5 4 3 2 1 0 Droga 1 Droga 2 Ambas Drogas Semanas Sin Droga H5N1 H1N1 Virus X

Fig. 3Grafico Supervivencia/Semanas. Droga1 (Zanamivir y oseltamivir). Droga2 (anamtadina y rimantadina)

Materiales y Métodos Reacción en cadena de la polimerasa por transcriptasa inversa (RT-PCR).
Es una potente técnica para la identificación de genomas del virus de la gripe. El genoma del virus de la gripe es un ARN de hebra única; en primer lugar hay que sintetizar una copia de ADN (ADNc) utilizandouna polimerasa de transcripción inversa (transcriptasa inversa, TI). El procedimiento de amplificación del genoma de ARN un par de oligonucleótidos cebadores. Los pares de cavadores se diseñan en función de la secuencia conocida del gen HA de los subtipos de gripe A y del N1, y amplifica específicamente el ARN de un solo subtipo. Los cebadores que se enumeran a continuación son los recomendadospor los laboratorios de la OMS para el H5.

Resultados

Fig. 4 Imagen microscópica. Imagen A se observan células infectadas. Imagen B presencia de drogas 3 días. Imagen C 15 días el virus toma resistencia a la droga infectado nuevamente la célula hasta la muerte.

Conclusión
Sabemos que existen múltiples enfermedades virales que afectan tanto al ser humano, como a los animales, la másimportante y peligrosa es la H5N1 (gripe aviar), donde hasta el día de hoy cepas de virus se han hecho resistentes lo que hace muy difícil encontrar un método de solución a estas enfermedades, por estas razones es que científicos tiendes a buscar nuevas drogas y plantear nuevos procedimientos de rebusca. Finalmente deducimos que existen drogas para combatir el virus pero no para destruirlas, siendo...