Potencial Hidrico

PRACTICAS DE BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

INDICE 1. MICROPROPAGACIÓN 1.1. Medios de cultivo. 1.1.1. Medio de Cultivo de Murashige y Skoog . 1.1.1.1. Elaboración de Soluciones Madre del medio de cultivo Murashige y Skoog. 1.1.1.2. Preparación del medio de cultivo Murashige y Skoog. 1.1.2. Otros medios de cultivo. 1.2. Establecimiento in vitro. 1.2.1 Asepsia superficial de material vegetal. 1.3.Proliferación 1.3.1. 1.4. 1.5. Desarrollo de material vegetal in vitro Enraizamiento in vitro Aclimatación

2. CULTIVO DE MERISTEMOS 2.1. Microinjerto 3. CULTIVO DE CALLO 4. SUSPENSIONES CELULARES 4.1. Viabilidad de células aisladas 5. EMBIOGÉNESIS SOMATICA 6. SEMILLAS ARTIFICIALES 6.1 Encapsulación en gel de alginato 7. MICORRIZACIÓN CONTROLADA IN VITRO 7.1. Aislamiento y cultivo de hongosmicorrícicos 7.2. Plantas micropropagadas 7.3. Inoculación de plantas micropropagadas con hongos ectomicorrícicos 8. BIBLIOGAFÍA

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1.- MICROPROPAGACIÓN
El cultivo in vitro permite el crecimiento y desarrollo de material vegetal en recipientes que lo separan del ambiente exterior y lo mantienen en condiciones controladas y asépticas. Entre las diversas técnicas de cultivo in vitro, lamicropropagación consiste en la producción clonal de vegetales a partir, generalmente, de ápices o explantos nodales de una planta madre. La gran producción de nuevas plantas se ve favorecida gracias al rápido crecimiento del material vegetal in vitro y a la proliferación de tallos durante los subcultivos. Un programa de micropropagación puede comprender las siguientes etapas: Etapa 0: Selección yacondicionamiento de la planta madre Etapa I: tratamientos de asepsia y establecimiento del cultivo mediante Etapa II: Desarrollo y multiplicación de los brotes Etapa III: enraizamiento o acondicionamiento de los brotes para su aclimatación a condiciones ex vitro. Etapa IV: Aclimatación a condiciones ex vitro. E0 E1 E1

Planta madre Asepsia Establecimiento del cultivo in vitro

E2

Proliferación

E3Enraizamiento / Acondicionamiento

E4

Aclimatación

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1.1.- MEDIOS DE CULTIVO Antes de realizar la asepsia del material vegetal que se va a introducir in vitro, es necesario disponer de Medios de Cultivo esterilizados y dosificados en recipientes adecuados. Una parte importante del cultivo in vitro son los Medios de Cultivo ya que en ellos se encuentran las sustancias necesarias para elcrecimiento y desarrollo de los tejidos vegetales. Un medio de cultivo es una solución acuosa en donde se encuentran disueltas sales minerales que aportan los elementos esenciales Macronutrientes (N, P, K, S. Ca y Mg) y Micronutrientes (Fe, B, Mn, Zn, Cu, Mo, y Co). Normalmente es imprescindible una fuente de carbono, generalmente la sacarosa, debido a la escasa actividad fotosintética de lostejido in vitro. Además, el medio puede ser enriquecido con Aminoácidos, Vitaminas y Reguladores del Crecimiento. Los medios de cultivo se preparan a partir de soluciones concentradas 10 o 100 veces (Soluciones Madre o Stock). En la solución madre se pueden mezclar varias sales minerales siempre que no se produzcan problemas de precipitación. Algunos elementos, como el Fe, se utilizan en forma dequelatos para mantener su disponibilidad durante el cultivo. Los medios de cultivo se pueden utilizar de forma líquida o con un agente gelificante como el agar.

1.1.1.-MEDIO DE CULTIVO DE MURASHIGE Y SKOOG. El Medio de Cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) se realiza con las siguientes sustancias: Macronutrientes mg/L (NH4 )NO3 MgSO4.7H2O KNO3 KH2PO4 CaCl2.2H2O 1650 370 1900 170 440

4Micronutrientes mg/L FeSO4.7H2O Na2EDTA H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O KI 27,8 37,3 6,2 22,3 8,6 0,25 0,025 0,025 0,83

Vitaminas mg/L myo- Inositol Tiamina HCl Acido nicotínico Glicina Piridoxina HCl 100 0,1 0,5 2, 0 0,5

g/L Sacarosa Agar 30 7.5

1.1.1.1.- ELABORACIÓN DE SOLUCIONES MADRE DEL MEDIO DE CULTIVO MURASHIGE Y SKOOG Para la realización del medio de...