Potocolo Inmunohematologia

Protocolo práctico 1 Inmuhohematología  Clasificación ABO y Rh en LÁMINA (directa) Materiales: Laminas de vidrio Baguetas o tubo khan (2 por muestra) Pipetas Sueros clasificadores Anti A, B, AB, D ojala monoclonales Muestra de GR Procedimiento: En la lamina de vidrio marcar cada fila de pocillos con anti A, anti B, anti AB y anti D Agregar 1 gota de cada suero comercial (IgM monocolonal, use forslide) según corresponda. Agregar 1 gota de GR de la muestra (30-40%) en cada gota de suero y mezclar con la base de un tubo khan o con el borde de este. Mueva la lámina suavemente en círculos y observe si hay aglutinación. Registrar los resultados inmediatamente. (en cruces)

1) 2) 3) 4) 5)



Clasificación grupo ABO en TUBO (directa e inversa) Materiales: 7 Tubos khan Pipetas plásticasGradillas Centrifuga Sueros clasificadores ABO y Rh PBS GR testigo A1 y B lavados por 4 veces y suspendidos en EDTA 3-5% Suero antiglobulina Humana (SAGH) Muestra de sangre sin anticoagulante Procedimiento: 1) Marcar 7 tubos Anti A, B, AB, D y GR A1,GR B, PA 2) Colocar 2 gotas de los sueros correspondientes en cada tubo Antia A, B, AB, D y 2 gotas de suero del paciente en los tubos GR A1, B Y PA.3) Preparar suspensión GR del paciente al 3-5% y colocar 1 gota en los tubos Anti A, B, AB, D y PA. 4) En los tubos GR A1 Y GR B, colocar 1 gota de glóbulos rojos testigos según corresponda 5) Mezclar y centrifugar modo lectura y leer inmediatamente en la fuente de luz 6) Registrar resultados de la directa e inversa, la prueba autologa debe dar negativa en condiciones normales. 7) Si el tubo conAnti D da negativo o débilmente positivo realizar prueba Du.

Anti-A + + -

Anti-B + + -

Anti-AB + + + + +

GR A1 + + +

GR B + + + +

Grupo sanguíneo O A B AB A subgrupo A subgrupo + Ac

Interpretación del aglutinado en tubo: CRUCES 4+ 3+ 2+ 1+ APARIENCIA Botón único, sin células libres Reacción fuerte, numerosos aglutinados Grumo grande en un mar de grumos pequeños, sin GR libres.Muchos grumos pequeños en un mar de GR libres



Clasificación ABO Y Rh en GEL

Materiales: Gel 3 Tubos khan Micropipetas (p200) Puntas amarillas Pipetas plásticas Muestra de sangre Procedimiento: 1) Marcar gel. 2) En dos tubos preparar suspensión 1% de GR testigos A1 y B (están al 3-5%) y en otro tubo preparar suspensión de GR del paciente al 1% con 10µl GR paciente y 1mL PBS. (si es RNlavar 3- 4 veces previamente). 3) Agregar en pocillos del gel A1 y B 50 µl de GR testigos al 1% en PBS y 25 µl de plasma o suero del paciente. 4) Agregar en pocillos del gel A, B, D IgM, D IgM/IgG 50 µl de GR al 1% en PBS del paciente. 5) Centrifugar y leer. 6) Registrar resultados en cruces.



Detección antígenos Rh y no ABO

Materiales: Tubos khan Pipetas plásticas Sueros clasificadores(Anti-E, e-C, c, kidd, Kell etc.) Células I y II (controles + y -) Procedimiento: 1) Marcar tubos con el respectivo antígeno a identificar. 2) Preparar suspensión de los GR del paciente al 3-5% con PBS. 3) Agregar 1 gota de cada antisuero según corresponda y 1 gota de GR 3-5%. 4) Mezclar, centrifugar y leer. Registrar resultados. (si son IgM terminar aquí). 5) Si son IgG Incubo a 37°C por 30-45minutos, centrifugar, leer y registrar resultados. 6) Lavar 3-4 veces y secar bien después del último lavado. 7) Agregar 1 gota de SAGH a cada tubo centrifugar, leer y registrar resultados (en cruces). 8) A los tubos que den negativo agregar 1 gota de CCC, mezclar, centrifugar y leer, este debe ser positivo. Fenotipo y genotipo Rh D + + + + + + C + + + E + + + c + + + + + + e + + + + + + fenotipoGenotipo Genotipo Frecuencia % DCcEe DCe/DcE R1/R2 12 DCce DCe/dce R1/r 31 DcEe DcE/dce R2/R 11 DCe DCe/DCe R1/R1 17,7 DcE DcE/DcE R2/R2 2 Dce Dce/dce R0/r 2 dce Dce/dce r/r 15



Clasificación Recién Nacido en LÁMINA (directa)

Materiales: PBS Pipetas plásticas 2 tubos khan (por muestra para mezclar) Lámina Sueros clasificadores: Anti A, Anti B, Anti AB, Anti D Procedimiento 1) Agregar 1...