Pràctica Biologia, Transformació Bacteriana

1. Objectiu
L’objectiu d’aquesta pràctica és realitzar un procediment de transformació genètica.

2. Resum Teòric
El plasmidi PGLO està genèticament dissenyat per portar el gen GFP que codificaper a la proteïna verda fluorescent GFP, i un gen (bla) que codifica per a una proteïna que dóna la resistència bacteriana a un antibiòtic.
La transformació genètica ocorre quan una cèl•lula incorporai expressa un nou tros de material genètic. Aquesta informació genètica proporciona a l’organisme un nou tret que es pot identificar de diverses maneres després de la formació.

3. Material
Un Kitde transormació PGLO, que conté:
1 placa d’Ecolli
1 placa LB
2 LB/amp
1 LB/amp/ara
1 eppendorf amb 500 microlitres de solució de transformació
1 eppendorf amb 500 microlitres de brou nutritiuLB
7 Nanses de Kolle
5 pipetes
1 gradeta d’escuma per eppendorfs
Contenidor de porexpan pel gel
2 eppendorfs
1 rotulador de vidre

 
4. Procediment
Primer de tot hem d’etiquetar dos tubsd’eppendorf tancats, hi hem de posar +PGLO i -PGLO, els haurem de posar a la gradeta per tubs d’escuma.
Haurem de posar a cada eppendorf 250 microlitres de solució de transformació, després d’això hauremde posar els tubs en gel picat.
Utilitzarem una nansa estèril per agafar tan sols una sola colònia de bacteris de la placa amb colònies d’Ecolli i introduirem aquesta colònia al tub marcat comPGLO+.
Després d’això, posarem el tub en gel un altre cop i repetirem el procés amb el tub PGLO-.
Seguidament, submergim una nansa dins la solució de plasmidi i després l’introduïm la nansa amb elplasmidi dins el tub d’eppendorf PGLO+. El tanquem i el retornem al gel.
Després incubem els tubs en gel durant 10 minuts. Mentrestant, etiquetem les quatre plaques de pGLO a la part inferior.
Introduïmels dos tubs d’eppedorf al bany termostàtic a 42ºC durant 50 segons, quan aquests 50 segons han passat tornem els tubs al gel, el més ràpid possible. Deixem els tubs al gel durant 2 minuts....