PRÁCTICA 2 Metodos








PRÁCTICA
“DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE ENZIMAS PROTEOLÍTICAS
MÉTODO DE KUNITZ.”



Nombre: Rodríguez Elizarraras Miguel Ángel
Grupo: 5QM1
Sección: 2
Maestra: LARIOS SERRATO VIOLETA
Fecha de entrega: 13-oct-15

















Objetivos
Elaborar una curva estándar de actividad enzimática
Determinar la actividad proteolítica de la bromelaína, papaína y otras proteasas.

IntroducciónLas enzimas son macromoléculas que sirven de biocatalizadores para las reacciones que se llevan a cabo dentro de una célula eucariote como procariote.  Las enzimas funcionan disminuyendo la energía de activación (ΔG‡) de una reacción, de forma que se acelera sustancialmente la tasa de reacción. Las enzimas no alteran el balance energético de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lotanto, el equilibrio de la reacción, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reacción que se produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho más deprisa que la correspondiente reacción no catalizada. Para llevar a cabo su función las enzimas tienen un sitio activo en donde ingresa el sustrato para formar un complejoenzima sustrato y después tener la enzima y el producto.
Las enzimas se pueden clasificar en:
-Liasas
-Oxidoreductasas
-Isomerasas
-Transferasas
-Hidrolasas
-Isomerasas
Las enzimas proteolíticas o proteasas son un grupo de enzimas que descompone en unidades más pequeñas las proteínas.
Estas rompen la cadena larga de moléculas que forman las proteínas formando fragmentos más cortos llamados péptidos queson moléculas formadas por aminoácidos. Están presentes en bacterias y plantas pero son más abundandantes en los animales. Las enzimas proteolíticas o proteasas se denominan también proteinasas.
Las proteasas se producen de manera natural en el organismo y constituyen entre el 1% y el 5% del contenido genético. Estas enzimas juegan en la descomposición de largas cadenas proteicas en fragmentoscortos partiendo el enlace peptídico que une dos aminoácidos, así como también determinan el tiempo de vida de otras proteínas que juegan un papel fisiológico importante como son las hormonas, los anticuerpos u otras enzimas.







Resultados

Tubo
Concentración de Tripsina (mg/mL)
A280
Se toma la absorbancia del testigo 1 como referencia para las otras absorbacias.
A280 corregida


ProblemaTestigo


T1 y 1
0.04
0.397
0.089

0.308
T2 y 2
0.08
0.192
-0.248

0.103
T3 y 3
0.12
0.216
-0.243

0.127
T4 y 4
0.16
0.293
-0.247

0.204
T5 y 5
0.20
0.419
-0.228

0.33
PROBLEMAS
TI y I
Bromelaína 1:10
0.975
-0.239

0.886
TII y II
Bromelaína 1:20
0.580
-0.113

0.491
TIII y III
Papaína 1:2
0.546
0.213

0.457
TIV y IV
Papaína 1:4
1.387
0.552

1.298





¿Cuántas unidades Tripticas hay por mg de tripsina?R= 0.00044 UT/mg
[UT]mg= m/tiempo
[UT]mg= 0.0088/20
[UT]mg= 0.0181

Tubo
Unidades Tripticas
A280 corregida
1
7.04x10-4
0.308
2
1.448x10-3
0.103
3
2.172x10-3
0.127
4
2.89x10-3
0.204
5
3.62x10-3
0.33



a) Indique la actividad específica, en unidades trípticas por gramo de muestra de la piña (bromelaína) y la papaya (papaína)

Utilizando la ecuación de la recta despejamos “X” y sustituimos:X=y-b/m 
Bromelaína 1:10 A 280= 0.886, X=0.886-0.1709/0.3625= 1.9726x10(dilución)/25(g de piña) =0.7890UT
Utilizando la ecuación de la recta despejamos “X” y sustituimos: X=y-b/m 
Bromelaína 1:10 A 280= 0.491, X=0.491-0.1709/0.3625= 0.8830x20(dilución)/25(g de piña) =0.7064UT
Utilizando la ecuación de la recta despejamos “X” y sustituimos: X=y-b/m 
papaína 1:2 A 280= 0.457, X=0.457-0.1709/0.3625=0.7892x2(dilución)/25(g de piña) =0.0631UT
Utilizando la ecuación de la recta despejamos “X” y sustituimos: X=y-b/m 
papaína 1:4 A 280= 1.298, X=1.298-0.1709/0.3625=3.109 x4(dilución)/25(g de piña) =0.4974UT

Preguntas adicionales

a) Defina actividad enzimática y actividad enzimática especifica
Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 1...