Práctica. Clembuterol


Determinación de clembuterol por CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

I.-Fundamento
La muestra de hígado se tritura y se realiza una digestión ácida, se centrifuga y se toman 10 ml de sobrenadante, sila muestra es de orina tomar 10ml de sobrenadante, se lleva a un pH 10-11 con NaOH y se purifica por un cartucho de C18 (Sep Pack o similar). Después de eluir del cartucho con metanol, recojo estemetanol en un tubo y procedo a la evaporación.
El extracto orgánico evaporado a sequedad, se resuspende en acetato de etilo y se aplica sobre la placa de silica.
Se visualiza el clembuterol después deformar un azo-derivado con nitrito sódico y naftilen-diamina.

II.-Aparatos
a) Centrífuga (10000 x g.) con rotor para tubos de 50 ml.
b) Sistema de evaporación de corriente de Nitrógeno.
c)pHmetro.
d)Balanza de precisión.
e)Aplicador automático de capa fina, en su defecto manual con micro-jeringas.

III.-Material

a)Tubos de centrífuga de 50 ml.
b)Microjeringas de 50l.
c) Cartuchosde C18 de 300 mg.
d)Cubeta cromatográfica.
e)Placas de HPTLC de Silicagel 60, 5x5 cm. (Merk o similar).
f)Matraces.
g)Pipetas graduadas.
h)Pipetas Pasteur.

IV.-Reactivos.

a)Aguadesmineralizada (Milli.Q o similar)
b)n-Hexano p.a.
c)Hidróxido Sódico p.a.
d)Ter-butilmetil eter para análisis de residuos.
c)Acido acético p.a.
d)Acido clorhídrico 1N p.a.
e)Acido clorhídrico 0,01N.Transferir 1 ml de ácido clorhídrico 1N (IV d.) a un matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua desmineralizada.

f)Acetato de etilo para análisis de resíduos.
g)Metanol grado HPLC.
h)Nitrito Sódico(Merk).
i)Gas nitrógeno “U” (99,99%)
j)Clenbuterol (Sigma)
k) Naftiletilendiamina dihidroclorada (Sigma)
l) Solución de hidróxido sódico 2N:
m) Solución hidróxido sódico 0,1 N.
n) SoluciónNaftiletilendiamina (IV j.) al 0,4% en metanol. Disolver 0,2 gr de naftiletilendiamina y enrasar a 50 ml con metanol (Preparar diariamente).
o) Solución de nitrito sódico 1% en HCL 1 N (100ml)....