Práctico Test de esterilidad


PRÁCTICO TEST DE ESTERILIDAD



PARTE TEÓRICA

Esterilidad = ausencia de cualquier forma de vida
El término esterilidad es absoluto.
El proceso mediante el cual se logra este estado se denomina ‘esterilización’ y se define como ‘el proceso de eliminación de toda forma de vida’.

La esterilización es un proceso que está diseñado para minimizar la probabilidad de que hayamicroorganismos sobrevivientes.
Por lo tanto, siempre existe una probabilidad finita de que quede algún microorganismo vivo.

¿Qué es el test de esterilidad?
Es un test que se aplica a productos que deben ser estériles y se realiza para verificar que efectivamente están libres de contaminación microbiana.

Limitaciones del test de esterilidad:
1) Es un procedimiento destructivo, por lo tanto sólo sepuede aplicar a una parte del lote del material a analizar. Por esta razón no puede asegurarse la esterilidad total del lote.
Empleando conceptos estadísticos, se recurre a un plan de muestreo que establece para un nivel de confianza dado, que el porcentaje de contaminación del lote está por debajo de cierto límite.

Por ejemplo: para un resultado negativo (ausencia de crecimiento) en 20 muestrasde un lote dado, se asegura con un nivel de confianza del 95% que el nivel de contaminación del lote está por debajo del 15%.
Para asegurar que ese lote tiene un nivel de contaminación menor que el 1% con un nivel de confianza del 99%, sería necesario analizar 500 muestras, lo que resultaría impracticable
Tal como está diseñado el método sólo permite detectar una contaminación grosera.
2) Elensayo no garantiza la detección de todos los microorganismos conocidos. Es imposible diseñar un método que permita recuperar todos los posibles microorganismos contaminantes. Los medios de cultivo empleados y las condiciones de incubación limitan el número de microorganismos a recuperar a un cierto grupo. Quedan excluidos los m.o. exigentes, los anaerobios estrictos y los virus. A ello se agregael hecho de que si el material fue sometido a un proceso de esterilización, los m.o. sobrevivientes se encuentran ‘estresados’ y no se recuperan e las condiciones de realización del test, pero pueden proliferar en medios más ricos como el medio interno.
3) Para darle confiabilidad a un resultado positivo del test (desarrollo de m.o.) habría que asegurarse de que la contaminación no fueintroducida durante la realización del ensayo (falso positivo). Aunque se han mejorado las condiciones de realización del mismo, todavía siguen siendo un factor importante de error. Esto se contrapone a la idea de que se debe aumentar el número de muestras para aumentar la confiabilidad del test porque también aumenta la probabilidad de tener falsos positivos.

Métodos oficiales
Inoculación directa:consiste en la transferencia directa del producto a ensayar desde su recipiente de origen al medio de cultivo apropiado.

Filtración por membrana: consiste en la filtración del producto a ensayar o una solución del mismo, a través de una membrana de porosidad adecuada (0.45 + 0.02 u). Los m.o. quedan retenidos en la membrana y ésta se coloca asépticamente en los medios de cultivo y se incuba. Seaplica a formas líquidas y a productos que pueden solubilizarse en disolventes apropiados (esterilizables e inocuos para los m.o.). Es el método de elección siempre que sea posible. Es particularmente apropiado para productos con propiedades bacteriostáticas o fungistáticas.

Comparación de ambos métodos:
El método de filtración por membrana es más sensible porque permite ensayar un volumen mayorde muestra y por lo tanto aumenta la probabilidad de encontrar microorganismos en el lote.
El método de filtración consume menos cantidad de medios de cultivo, pero requiere equipo especializado.


Diseño experimental
Muestreo:
Cuando se trata de soluciones, el número de unidades a testear y la toma están fijadas por el contenido de cada unidad, según tablas que figuran en las farmacopeas....