Prática 1 Determinación de aminoácidos terminales con grupo alfa amino libre. Método de Sanger
Páginas: 4 (797 palabras)
Publicado: 19 de septiembre de 2013
Introducción:
La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación. Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos, el primero en lograresto fue Frederik Sanger, quien diseño un método capaz de determinar la secuencia de los aminoácidos en una proteína, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso del1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB). Este compuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas, formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionaracon los grupos imidazol, fenólicos y epsilon amino; por lo que se dará una dinitrofenilacion en la cadena lateral de la Tirosina, Histidina y Lisina.
Al hidrolizar el péptido o la proteína yadinitrofenilada, se da una ruptura total de los enlaces peptídicos, lo que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlacees más difícil de romper.
Los DNP de aminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoácidos libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente nopolar.
Estos DNP de aminos terminales son sometidos a una cromatografía en capa fina o en papel Whatman; por lo que se determina por comparación con otros DNP derivados de aminoácidos, al aminoterminal de la proteína.
Objetivos:
El alumno utilizara el método de Sanger para identificar los aminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina.Interpretación de cada paso efectuado en la preparación del derivado dinitrofenilado.
1. Preparación del Derivado Dinitrofenilado de la Hemoglobina.
a) La reacción se debe de llevar en MedioBásico, como el amino terminal esta protonado no se puede llevar a cabo la reacción por esta razón se cambia el pH para poder desprotonar.
b) Se agrega el DNFB para marcar al amino terminal de la...
La determinación de la estructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación. Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos, el primero en lograresto fue Frederik Sanger, quien diseño un método capaz de determinar la secuencia de los aminoácidos en una proteína, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso del1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB). Este compuesto químico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas, formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionaracon los grupos imidazol, fenólicos y epsilon amino; por lo que se dará una dinitrofenilacion en la cadena lateral de la Tirosina, Histidina y Lisina.
Al hidrolizar el péptido o la proteína yadinitrofenilada, se da una ruptura total de los enlaces peptídicos, lo que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlacees más difícil de romper.
Los DNP de aminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoácidos libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente nopolar.
Estos DNP de aminos terminales son sometidos a una cromatografía en capa fina o en papel Whatman; por lo que se determina por comparación con otros DNP derivados de aminoácidos, al aminoterminal de la proteína.
Objetivos:
El alumno utilizara el método de Sanger para identificar los aminoácidos que contienen el grupo alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina.Interpretación de cada paso efectuado en la preparación del derivado dinitrofenilado.
1. Preparación del Derivado Dinitrofenilado de la Hemoglobina.
a) La reacción se debe de llevar en MedioBásico, como el amino terminal esta protonado no se puede llevar a cabo la reacción por esta razón se cambia el pH para poder desprotonar.
b) Se agrega el DNFB para marcar al amino terminal de la...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.