PR CTICA 1

PRÁCTICA 1.
RECONOCIMIENTO DE MICROORGANISMOS BIOCONTROLADORES.
1. INTRODUCCIÓN
El control con microorganismos biocontroladores es un componente importante dentro de los programas de Manejo integrado de plagas y enfermedades en poblaciones y sistemas agrícolas.
Existen distintos tipos de hongos empleados para el control, entre los cuales se encuentran los géneros Trichoderma, Paecilomyces,Beauveria, Metarhizium así como las bacterias Serratia, Pseudomonas y Bacillus. Se hace necesario entonces, conocer e identificar correctamente tales microorganismos, con el fin de poderlos emplear dentro de programas de manejo integrado.
2. OBJETIVO
Identificar características Morfológicas de algunas de las bacterias, hongos y nemátodos empleados para el control Microbiológico
3. MATERIALES PORPAREJA.
 Colorantes de gram.
 Colorantes cristal violeta.
 Lamina, laminillas.
 Mecheros
 Estiletes
 Toallas cortadas.
 Marcador indeleble.
 Una cajita por pareja de los microorganismos:
 Bacilos Gram positivos esporulados y Gram negativos.
 Hongos biocontroladores: Beauveria sp. , Trichoderma sp., Paecilomyces sp.
 Baño María a 80ºC.
 Suelo (100 g).
 Tubos con 5 ml deADE.
 Pinzas de madera.
 Termómetro
 Pipeta de 100 y 200ul.
 Puntas amarillas.
 Medio para Bacterias (TSA o Agar nutritivo).
 Asas de vidrio.
 Vinilpel.
4. METODOLOGﾍA
Coloración de Gram
Coloración de Esporas
Coloración con azul de lactofenol
Identificación de colonias de hongos
A. COLORACION DE GRAM.
1. Realizar el extendido de las bacterias que se van a estudiar
2. Secar atemperatura ambiente o a 37 C máximo y fijar con mechero.
3. Agregar cristal violeta por 1 minuto
4. Lavar
5. Agregar lugol por 1 minuto
6. Lavar
7. Agregar alcohol acetona por 8-10 segundos
8. Lavar
9. Agregar safranina por 1 minuto
10. Lavar
11. Limpiar por debajo, secar al aire libre o a 37 C máximo.
B. COLORACION DE ESPORAS.
1. Realizar el extendido de las bacterias que se van aestudiar
2. Agregar Verde de Malaquita durante 5 minutos, durante los cuales debe se debe calentar con el mechero. Evitar que la muestra hierva; evitar que la muestra se seque.
3. Dejar enfriar aproximadamente 5 minutos
4. Lavar para retirar el exceso de colorante
5. Agregar safranina por 1 minuto
6. Enjuagar
7. Limpiar por debajo, dejar secar al aire libre o a 37 C máximo.
Las coloraciones deGram y de esporas deben estar secas antes de observarlas en el microscopio de luz en objetivo de 100X con aceite de inmersión.
C. AZUL DE ALGODÓN CON LACTOFENOL.
1. Realizar una suspensión del hongo sobre una gota de colorante de azul de Lactofenol
2. Colocar una laminilla sobre la muestra.
3. Observar en microscopio de luz en 40X.
Para facilitar la observación de la placa, debe emplearsepoca cantidad de muestra y de colorante. Los excesos deben limpiarse cuidadosamente con el borde de un pañuelo desechable.
PRﾁCTICA No 2.
AISLAMIENTO DE HONGOS BIOCONTROLADORES POR EL MﾉTODO DIRECTO- AISLAMIENTO DE NEMATODOS A PARTIR DE SUELOS Y RAﾍCES.
1. INTRODUCCIﾓN
La búsqueda continua de microorganismos biocontroladores en ambientes naturales es una actividad necesaria, ya que se requieredisponer de una gama de alternativas para usar en un momento determinado contra plagas que presentan resistencia a productos químicos. Existe, en la naturaleza, gran variedad de sustratos para aislar dichos microorganismos. En este sentido resulta ideal poder aislar microorganismos de insectos,
3. MATERIALES
 Estiletes (1 por pareja).
 Mecheros (1 por pareja).
 Medio de cultivo (dos cajaspor pareja).
 Vinilpel (Rollo).
 Estereoscopio.
 Azul de algodón.
 Láminas.
 Laminillas.
 Papel Kleenex (4-5 por pareja).
 Bandejas plásticas (1 por pareja).
 Canastas (1 por pareja).
 50 gr de suelo por pareja (Nevera, bolsa negra).
 Frasco lavador (2 unidades).
 Raíces (nevera bolsa negra).
 Bisturi (1-2 unidades).
 NaOCl (5-10%).
 Frascos con tapa rosca (1 por...