Pr Ctica De Laboratorio 4 Cuantificaci N De Prote Nas

Ingeniería en Biotecnología
PRACTICA DE LABORATORIO # 4
1. TEMA: Cuantificación de proteínas a partir de extractos proteicos de origen animal.
2. IDENTIFICACIÓN:
Asignatura: Bioquímica I

Sigla:IBT411

Período: 2015-1

Paralelo: 1

Sesiones: 1

Profesora: Ing. Gabriela Granja MSc.

3. OBJETIVOS
3.1. OBJETIVO GENERAL:
Aplicar los conocimientos adquiridos en clase acerca del proceso general decuantificación de proteínas.
3.2. OBJETIVO ESPECÍFICO:


Cuantificar las proteínas resultantes de cada fracción obtenidas en la práctica 3
mediante el empleo de espectrofotometría.

4. FUNDAMENTOTEÓRICO
Las técnicas de cuantificación de proteínas empleadas en laboratorio se basan en la
capacidad que poseen estas moléculas de formar complejos colorimétricos cuya formación,
proporcional a lacantidad de proteínas presentes en la solución, puede ser medida gracias al
empleo del espectrofotómetro a una longitud de onda específica. Tal es el caso del método de
Biuret en el cual la reacción entreel cobre (presente en el sulfato cúprico) con los enlaces
peptídicos de las proteínas genera el complejo que posee una coloración violeta-púrpura que
presenta un máximo de absorción a 545nm. Lasprincipales características de esta reacción
son que el rango de determinación de esta reacción es de hasta 6mg/mL y que no depende
de la composición de aminoácidos como la cuantificación basada enespectrofotometría a
280nm, la cual solamente detecta la presencia de los aminoácidos tirosina y triptófano en las
muestras sin reacción colorimétrica siendo por tanto algo inespecífica. (1-3).
En estapráctica, realizaremos la cuantificación del extracto proteico total de cada fracción
obtenida mediante la reacción de Biuret leyendo la absorbancia obtenida en cada caso a
545nm.

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5. MATERIALES Y REACTIVOS
5.1. MATERIALES
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3 Cajas isotérmicas con hielo
3 Micropipetas (1mL)
3 cajas de puntas de micropipetas (1mL)
90 Microtubos de 2mL
Cubetas de...