Pr Ctica N 2 Bioqu Mica


CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS – MÉTODO DE BIURET


Fecha: 28 de Abril de 2015

Integrantes:
Daniela Naranjo López
Carolina Rodríguez López


OBJETIVO
Analizar a través de los procesos de separación y cuantificación de proteínas las concentraciones de albúmina y globulinas que hay presentes en el suero sanguíneo, mediante el uso adecuado de las técnicas de centrifugación y fotocolorimetría.INTRODUCCIÓN
Las proteínas son macromoléculas con una gran cantidad de funciones en las células de todos los seres vivos. Éstas hacen parte de las estructuras básicas de los tejidos y, a su vez, desempañan funciones metabólicas y reguladoras en los organismos. Es por ello que, los estudios que se realizan sobre las proteínas son fundamentales, puesto que, a partir de la determinación de suconcentración es posible conocer la actividad específica de una preparación enzimática, diagnosticar enfermedades y conocer muchas otras cosas. Finalmente, para lograr esto, es decir, para cuantificar proteínas, existen varios métodospara conseguirlocomo lo es el Método de Biuret, el cual es usado para preparados muy concentrados como lo es el Suero Sanguíneo.





CÁLCULOS

Concentración Solución PatrónGelatina = 8 mg/ml.
𝜆𝑚á𝑥 = 540nm
Cada una de las soluciones utilizadas, luego de haber sido preparadas y previamente agitadas, se dejaron en reposo durante 30 minutos, para luego medir su Absorbancia a un 𝜆 = 540nm en el fotocolorímetro; en este caso, el blanco para calibrar fue una solución de 1 ml de solución salina con 4 ml de Biuret.

Tabla 1. Absorbancia de cada sustancia a un 𝜆 = 540nm, consus concentraciones respectivamente halladas a partir de la concentración conocida de la solución patrón de gelatina.

Tubo
Absorbancia
Concentración (mg/ml)
Patrón Gelatina
0.329
1.6
Globulinas
0.214
7.25
Proteínas Totales
0.179
54
Albumina
-----
46.75


a) Dilución del patrón:

Cf = Ci*Vi Por lo tanto: Cf= (8 mg/ml)*(1ml) = 1.6 mg/ml 
Vf(5ml)

Donde Cf: concentración final. Ci: concentración inicial
Vf: volumen final. Vi: volumen inicial.


b) Concentración de proteínas totales en suero:




A partir de la información suministrada en la guía del laboratorio, se tiene que la solución patrón gelatina, tiene una concentración de 0.45 g en 100 mL de solución salina 0.9 %, lo que es equivalente atener 0.45% de solución patrón.

(%) proteínas = 0.45% (0.179) = 0.54%
0.329



Sin embargo, esta concentración (0.54) corresponde a 1ml de suero sanguíneo, el cual fue diluido (1:20) y luego 5 veces, de manera que el resultado final será:

(%) proteínas totales = 20 * 5 * 0.54%
(%) proteínas totales = 54


c)Concentración de globulinas:

(%) globulina = (%) solución patrón * Absorbancia (solución globulina)
Absorbancia (solución patrón)

(%) globulina = 0.45% * 0.214  (%) globulina = 0.29
0.329

Sin embargo, esta concentración (0.29) corresponde a una solución de globulinas preparada con: 1 ml de globulinas + 4 ml deReactivo de Biuret, para un total de 5 ml y, además, se le agregaron 5 ml de solución salina, por lo tanto se dice que, fue obtenida por una dilución (1:5:5), así, la solución original de suero sanguíneo debe tener una concentración 25 veces mayor:

(%) globulinas finales = 5 * 0.29 *5
(%) globulinas finales = 7.25


d) Concentración de albumina en suero:

(%) albumina = % Proteínas totales - %globulinas finales
(%) albumina = 54 – 7.25
(%) albumina = 46.75









RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Análisis de resultados:

A partir del proceso experimental realizado se puede considerar que el Método de Biuret es muy ventajoso para la cuantificación de proteínas, siempre y cuando la concentración de dicho conjunto de aminoácidos a analizar sea adecuado, puesto que, a partir de esto, se da la...