Pr Cticas De Bioqu Mica




Práctica 3
Aislamiento de lactosa

Objetivo
Obtener un carbohidrato de origen natural atendiendo a sus propiedades físico-químicas, mediante técnicas sencillas de laboratorio.

Fundamento
La lactosa O--D-galactopyranosyl-(14)-D-glucopyranose o azúcar de la leche se encuentra naturalmente en la leche en un rango de concentración entre 0 y 7%, dependiendo de la especie. Los niños tienen laenzima intestinal -D-galactosidasa o lactasa que hidroliza la lactosa para que sus componentes puedan ser absorbidos hacia la sangre. La mayoría de los adultos, en cambio, tienen un bajo nivel de esta enzima. Por ello, la lactosa se mueve sin hidrolizarse por el tracto intestinal hasta el colon donde su fermentación bacteriana produce grandes cantidades de CO2, H2 y ácidos orgánicos irritantes.El resultado es la difundida intolerancia a la lactosa en la edad adulta.
La lactosa se recupera del suero restante en la leche después de precipitar y remover las proteínas. El carbono anomérico libre de su residuo de glucosa lo hace un azúcar reductor. Bajo hidrólisis del enlace glicosídico la lactosa produce una molécula de glucosa y una de galactosa.

Material y equipo utilizado
Probeta de100 mL,
Termómetro,
Agitador de vidrio,
Embudo Büchner,
Embudo de vidrio,
Parrilla de calentamiento,
Dos matraces Kitasato de 250 mL con trampa de vacío,
Bomba de vacío,
Manguera de látex,
Vaso de precipitados de 250 mL,
Vidrio de reloj,
Papel filtro,
Adicionalmente: cada equipo aportará gasas


Reactivos empleados
Leche descremada en polvo,
Carbonato de Calcio,
Acido acético al 10% (V/V),
Etanolal 96% (V/V),
Agua destilada

Procedimiento
1. Coloca 25 g de polvo de leche descremada en un vaso de 250 mL.
2. Adiciona 75 mL de agua caliente y agita. Ajusta la temperatura de la mezcla a 50ºC.
3. Agrega 10 mL de solución de ácido acético al 10% (V/V) y agita la mezcla por 15 min para coagular la caseína. La precipitación es completa cuando el color del líquido cambia de blanco lechoso aamarillo transparente.
4. Remueve la caseína precipitada filtrando la mezcla por gravedad a través de cuatro capas de gasa doblada. Colecta el filtrado en un matraz de 250 mL. Este lleva la lactosa.
5. Adiciona 2 gramos de CaCO3 en polvo, agítalo bien y hierve la suspensión por 10 minutos.
6. Agita y filtra a vacío esta suspensión sobre papel filtro en un embudo Büchner. Elimina el residuo sólido.
7.Transfiere el filtrado a un matraz de 250 mL y concéntralo a un volumen de 30 mL aproximadamente, por ebullición en la parrilla eléctrica. Evita proyecciones agitando frecuentemente.
8. Retíralo de la fuente de calor y agrega 125 mL de etanol al 96% (V/V)
9. Agita la mezcla y fíltrala nuevamente.
10. Transfiere el filtrado a un vaso de precipitados, tápalo y déjalo en reposo durante 24 h.
11.Retira el sobrenadante por succión y entrégalo al maestro para su recolección. No lo viertas a la tarja !
12. Colecta los cristales. Estos pueden ser lavados nuevamente con un poco de etanol al 96% (V/V). Permite que se sequen.
13. Pesa los cristales obtenidos y calcula el rendimiento obtenido.
14. Conserva la lactosa obtenida para las prácticas posteriores.




Investigación previa
1. Cita dospropiedades físicas y/o químicas de los carbohidratos que permitan su separación y su purificación.
2. ¿Qué porcentaje de carbohidratos contiene la leche descremada que utilizarás en esta práctica?
3. ¿Cuánto de ese porcentaje corresponde a lactosa?
4. ¿Cuál es el rendimiento teórico esperado?

Referencias
Ault, Addison, Techniques and Experiments for Organic Chemistry. 6° Edición. UniversityScience Books. 1998.
Nelson, David L. and Cox, Michael M. Lehninger: Principles of Biochemistry. 4º Edición. Ed. Worth Publishers. 2004.


Respuestas:

Práctica 3
Aislamiento de glucógeno


Objetivo
Obtener un carbohidrato de origen natural atendiendo a sus propiedades físico-químicas, mediante técnicas sencillas de laboratorio.

Fundamento
El glucógeno es la forma de almacenamiento de la...