Praacticas de bioquimica 1º de medicina

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* Asignatura Biología Molecular e Inmunología
* CUADERNO DE PRÁCTICAS
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* 1º Curso Grado en Medicina

ALUMNO /A………………………………………………………………………………

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* Asignatura Biología Molecular e Inmunología
*CUADERNO DE PRÁCTICAS
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* 1º Curso Grado en Medicina

ALUMNO………………………………………………………………………………

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* INDICE
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Práctica 1.- IDENTIFICACIÓN DE LOS ÓRGANOS LINFOIDES.

Práctica 2.- ENSAYO DE FAGOCITOSIS DE MACRÓFAGOS PERITONEALES

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La realización de este cuaderno de prácticas es obligatoria para poder obtener una calificación que promedie con la del examenteórico.

El cuaderno se entregará en el Departamento de Bioquímica y Biología Molecular III e Inmunología de la Facultad de Medicina, de acuerdo con el calendario que se fije en clase.

ÍNDICE

Práctica 1.- Amplificación PCR
Práctica 2.- Separación DNA
Práctica 3.- Identificación de órganos linfoides y extracción de linfocitos.
Práctica 4.- Ensayo de fagocitosis de macrófagos peritoneales.Seminario 1.- Biotecnología. Clonación.
Seminario 2.- Genoma Humano y Diagnóstico Molecular
Seminario 3.- Anticuerpos Monoclonales
Seminario 4.- Terapia Génica

Este cuaderno de prácticas ha sido editado en el Departamento de Bioquímica y Biología Molecular III e Inmunología por los profesores e investigadores

Blanco Muñoz, Osmany
Fárez Vidal, Mª Esther
García Olivares, Enrique
IribarIbabe, Mª Concepción (Coordinadora)
Leno Durán, Ester
Molina Pineda de las Infantas, Ignacio
Rojas Barros, Domingo I.
Romero García, Zulema
Ruiz Magaña, Mª José
Ruiz Ruiz, Mª del Carmen
Torres Pinedo, Antonio

PRÁCTICA 1.- REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA: PCR

OBJETIVOS DOCENTES
Conocer la técnica de la PCR y su importancia en medicina.

Esta práctica consiste en determinar elgenotipo de una serie de ratones transgénicos a partir de muestras de DNA de oreja y seleccionar, en función de éste, los animales correctos a cruzar.

INTRODUCCIÓN
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) fue desarrollada por Kary Mullis a mediados de los años 80. Con esta metodología se pueden producir en el laboratorio múltiples copias de un fragmento de DNA específico, incluso enpresencia de millones de otras moléculas de DNA. Se basa en la actividad de la enzima DNA polimerasa que es capaz de fabricar una cadena de DNA complementaria a otra ya existente. Sus únicos requerimientos son que existan nucleótidos en el medio (adenina, timina, citosina y guanina), que son los componentes de la cadena de DNA, y una pequeña cadena de DNA (oligonucleótido) que pueda unirse a lamolécula que queremos copiar para que sirva como cebador.
La PCR se desarrolla en tres pasos. El primero es la separación de las dos cadenas que forman la molécula de DNA que se quiere amplificar, para lo cual se debe calentar el DNA a una temperatura de 95-96 oC. Cada una de estas cadenas actuará como molde para fabricar su complementaria. A continuación se baja la temperatura para conseguir que cadacebador se una a su región complementaria dentro de la cadena de DNA. El último paso consiste en la generación de la cadena de DNA complementaria por acción de la DNA polimerasa. El problema con el que se encontraron los científicos que idearon esta técnica es que resulta preciso aumentar la temperatura de la mezcla de reacción hasta valores por encima de los 70°C para que las dos cadenas de DNAse mantengan separadas. A estas temperaturas tan elevadas la DNA polimerasa se inactivaba y era preciso añadirla de nuevo en cada ciclo. Esto fue así hasta que se descubrió la bacteria Thermus aquaticus que vive en aguas termales y cuya DNA polimerasa (Taq polimerasa) es capaz de trabajar a temperaturas superiores a los 70°C. De esta manera sólo hay que añadir la enzima al inicio del proceso de...