Practica 1: hidrolisis enzimática de un polisacárido vegetal (almidon)

Hidrolisis enzimática de un polisacárido vegetal (almidon)


EQUIPO: No. 8


INTRODUCCIÓN:
La fuente principal de la energía metabólica es la glucosa, que es almacenada intracelularmente en forma de polímeros. El homopolisacárido más común de la glucosa en las plantas y hongos es el almidón.
En las células vegetales el almidón se encuentra en forma de granos y es una combinación deamilosa y amilopectina. La amilosa que constituye del 20 al 30 % de la mayor parte de los almidones, es un polímero de estructura helicoidal no ramificada de glucosa y conectadas por enlaces glucosídicos (1- 4). La amilopectina que se encuentra en un 80- 70 % al igual que la amilosa está formada por radicales de glucosa conectadas por enlaces glucosídicos (1- 4), sin embargo la molécula estaramificada. En la cadena principal se asientan cadenas laterales unidas mediante un enlace (1- 6). Por término medio la cadena se va ramificando cada 25 radicales de glucosa.

ESTRUCTURA DEL ALMIDÓN

En las plantas existe la hidrolasa conocida como - amilasa que ataca a la molécula a partir de los extremos y libera paulatinamente moléculas de glucosa, de dos en dos, en forma de maltosa. En virtud deeste ataque a partir del extremo no tarda en aparecer azúcar reductor. La amilosa se hidroliza casi por completo y la amilopectina solo en un 50%, ya que la actividad enzimática se detiene al llegar a los puntos de ramificación, la degradación prosigue en el caso de que actúe la - amilasa que corta en la uniones (1- 6).
Durante la germinación de una semilla como el maíz, el agua se difunde através de las envolturas de la semilla y llega hasta el embrión. El agua hace que la semilla se hinche, a veces hasta el extremo de rasgar la envoltura externa. El oxígeno absorbido proporciona a la semilla la energía necesaria para iniciar el crecimiento. Diversas enzimas como las amilasas descomponen los nutrientes almacenados (almidón) en el endospermo o en los cotiledones en sustancias mássencillas (maltosa y glucosa) que son transportadas por el interior del embrión hacia los centros de crecimiento.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:

Comprobar la actividad enzimática de las amilasas producidas por semillas de
maíz al hidrolizar almidón y dando como producto final unidades de maltosa.

OBJETIVOS PARTICULARES:

Obtener semillas de maíz germinadas a 5, 3 y 0 días. Extraer lasenzimas de las semillas germinadas. Realizar una curva patrón con maltosa. Determinar la actividad de la enzima al hidrolizar almidón. Determinar la cantidad de reductores totales producidos de la hidrólisis enzimática.

HIPOTESIS:
La actividad enzimática de las semillas será mayor con el paso de los días de germinación.

Proceso y material

material
1 Mortero con pistilo
1 Bisturi
4 Tubos decentrifuga de 50 ml
1 Parrilla de calentamiento
2 Vasos de precipitación de 1 Lt
1 Termometro
1 Embudo de filtración
3 Pipetas pasteur
2 Pipetas de 1 ml
1 Pipeta de 5 ml
1 Pipeta de 10ml
9 Tubos de ensayo
1 Gradilla
1 Espectometro
1 Centrifugadora
1 Par de celdas
1 Agitador

REACTIVOS:
* Hipoclorito de sodio
* Acido succínico
* CaCl2
* Maltosa
* NaCO3anhídrido
* Tartrato de Na y K
* NaHCO3
* Na2SO4 anhídrido
* CuSO4 5H2O
* H2SO4
* Molibdato de amonio
* Arsenato de sodio 7H2O
* Almidón

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Macear el endospermo. Con amortiguador y filtrar en gasa
Macear el endospermo. Con amortiguador y filtrar en gasa

Seleccionar la semillas de 5, 3 y 0 dias
Seleccionar la semillas de 5, 3 y 0 diasFIN
FIN
Agitamos en el Vortex
Agitamos en el Vortex
Centrifugamos las mezclas a 3000 rpm por 5 minutos
Centrifugamos las mezclas a 3000 rpm por 5 minutos
INICIO

INICIO

Agregamos 8.5 ml de agua a cada muestra.
Agregamos 8.5 ml de agua a cada muestra.
Agregamos 0.5 ml de reactivo II a todas las muestras
Agregamos 0.5 ml de reactivo II a todas las muestras
Agregamos 0.5 ml de...