Practica 1 separacion de aminoacidos limon



Objetivos:
1. El alumno separará los aminoácidos presentes en jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina.
2. Se identificaran los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de las soluciones tipo de aminoácidos.
3. Comparará el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con la unidimensional.

Introducción:
La cromatografía es un método deseparación de sustancias de una mezcla problema, la cual consiste en colocar tiras de papel como soporte de una fase estacionaria acuosa mientras que una fase móvil orgánica o inorgánica se desplaza en la tira formando gotas de la sustancia a separar cerca del punto donde parte el desplazamiento de la fase móvil.
La distancia recorrida por el compuesto entre la distancia que recorre el frente delsolvente desde el sitio de aplicación se conoce como valor Rf (relación de frentes) del compuesto. Bajo condiciones controladas estrictamente el Rf es una constante importante con propósitos de identificación.
El método anteriormente descrito es la cromatografía unidimensional (C.U) la cual es útil cuando la mezcla contiene unos pocos componentes, en el caso de la cromatografía bidimensional (C.B)es una variante de considerable poder de separación ya que emplea dos fases móviles para desplazar un solo compuesto.
Diagrama de procedimientos:













Resultados:
Tabla 1. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las fases móviles.
Aminoácido
1° Fase móvil
2° Fase móvil

Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Frente del soluto
Frente del disolvente
Rf
Arg
2.5
7.5
0.33
1.27.2
0.16
Lys
4.3
7.5
0.57
0.8
7.2
0.11
Pro
5.5
7.5
0.73
2.4
7.2
0.33
Gly
6
7.5
0.80
2.3
7.2
0.31
Glu
6.3
7.5
0.84
2.7
7.2
0.50
His
6.4
7.5
0.85
1
7.2
0.13
Thr
6.5
7.5
0.86
2.5
7.2
0.34
Tyr
6.6
7.5
0.88
4.5
7.2
0.62
Met
6.7
7.5
0.89
4.3
7..2
0.59
Phe
6.8
7.5
0.90
4.9
7.2
0.68

Tabla 2. Cromatografía bidimensional tipo desarrollado en las 2 fases móvil



No. De Mancha
Rf Creciente en la 1° fasemóvil
Rf en la 2° fase móvil
Aminoácido Correspondiente
3
0.56
0.30
Pro
5
0.84
0.57
Phe
6
0.88
0.68
Glu


Figura no.1 Rfs de las manchas desarrolladas durante la cromatografía bidimensional en problema y los aminoácidos utilizados en la práctica.























De izquierda a derech el orden de las muestras es: Problema, Pro, Arg, Thr, Phe, Glu, His, Gly, Tyr, Lys, Met.
Discusiones.
Con losdatos obtenidos en las placas cromatograficas bidimensionales verificamos los aminoácidos presentes en nuestro problema de jugo de fruta (Limón). Con las cromatografías bidimensionales que fueron del problema y de los aminoácidos independientes se pudo realizar una comparación de Rf’s para poder determinar cuáles de estos estaban presentes en este jugo.
En la placa número 4 obtuvimos una manchadesproporcionada de la cromatografía, esto fue debido a que se tuvo un error de procedimiento en el cual no se debió haber colocado la cantidad indicada de muestra problema o se tuvo en un error de colocación de la placa no.4 en la fase móvil dos. Otro punto a discutir es que las dos fases móviles tuvieron diferente tiempo de corrimiento en la placa y diferente acción en las mismas.
Solo se pudieronidentificar tres aminoácidos de los 7 que presenta el limón, esto es debido que solo se utilizaron los aminoácidos proporcionados en la práctica que fueron solo 10 de los 20 aminoácidos libres, también hay que tomar en cuenta que los aminoácidos descritos en la fuente bibliográfica* no necesariamente tienen que ser los mismos que se identifican en esta práctica, ya que no se especifica de queespecie de limón, tal es el caso de que se haya encontrado la Phe en la muestra problema, solo se toman como aproximaciones a las cantidades de aminoácidos presentes en esta fruta.
Conclusiones.
Gracias a los resultados se puede concluir lo siguiente:
*La cromatografía bidimensional se utiliza cuando el problema tiene más de un componente comparando dos fases móviles y dos Rf’s.
*Los aminoácidos...