Practica 1 uso de micropipetas

Manual de Prácticas de Biología Celular
Práctica No. 1
Uso de micropipetas
OBJETIVO
El alumno se familiarizará con el apropiado uso de las micropipetas.
INTRODUCCIÓN
Durante el desarrollo de diversas técnicas y protocolos en Biología Experimental es necesario utilizar volúmenes pequeños de diversas soluciones. Para poder manejar estos volúmenes, se utilizan micropipetas de diferentescapacidades, dentro de las más comunes se encuentran micropipetas de volumen variable de: 0.5-10 μL, 2-20 μL, 10-100 μL y 100-1000 μL o de volumen fijo: 10, 20, 50, 100, 200 y 1000 μL, las de múltiples canales (multicanal) con posibilidad de 8 o 12 puntas con volúmenes varialbes de 20 a 200 o hasta 300 μL.
La unidad de medida de volumen es el litro (L), en las técnicas de Biología Experimental lasunidades más usadas son el microlitro (μL) y el mililitro (mL).
1 litro = 1000 mL, 1 mL = 1000 μL
EQUIPO Y MATERIALES
Micropipetas de volumen fijo de 10, 100 y 1000 μL
Micropipetas de volumen variable: 2-20, 20-200 y 100-1000 μL
Microtubos cónicos de 1.8 ML
Viales de vidrio de 2 ML de capacidad
Puntas para micropipeta con capacidad correspondiente a cada micropipeta
Balanza analítica
Centrífugaclínica
Agua destilada
Soluciones colorantes: rojo y azul

Aspectos importantes acerca del uso de micropipetas:

1. Las micropipetas son MUY COSTOSAS y son de uso indispensable en el laboratorio. Por lo que se requiere que todos los procedimientos que realices con las micropipetas sean con mucho cuidado y poniendo atención en todo momento.
2. Siempre que use la micropipeta, asegúrese de tener unapunta acorde al modelo de la micropipeta.
3. Mantenga en posición vertical la micropipeta cuando esté “pipeteando” la solución de trabajo.
4. Respete el rango especificado en la micropipeta. No trate de usar un volumen que no se encuentre en ese rango.
5. Controle la velocidad en la cual el émbolo de la micropipeta desciende y asciende. SIEMPRE PRESIONAR EL EMBOLO “SUAVEMENTE”.

Para el uso delas micropipetas es importante:

1. Verificar que se haya seleccionado la micropipeta correcta para el volumen que necesitas utilizar. En el laboratorio cuenta con las siguientes micropipetas: P-10 (para volúmenes de 0.5 a 10 μL), P-20 (para volúmenes de 2 a 20 μL), P-200 (para volúmenes de 20 a 200 μL) y P-1000 (para volúmenes de 100 a 1000) μL.
2. Ajustar la micropipeta al volumen deseado.
3.Seleccionar y poner la punta correcta en la micropipeta. Verificar que la punta esté correctamente colocada en el extremo de la micropipeta.
Existen diferentes tipos de puntas, generalmente las puntas de color amarillo se pueden utilizar con las micropipetas P-20 y P-200. Las puntas azules son para la micropipeta P-1000.

El instructor mostrará el correcto uso de la micropipeta. PONGA MUCHAATENCIÓN.



Para tomar el volumen deseado de la solución de trabajo:
1. Primeramente, debe abrir el contenedor de la solución (microtubo, tubo, frasco, etc.).
2. Sujete la micropipeta con una mano en posición vertical, mantenga el tubo con la otra mano. Realice este procedimiento a la altura de su vista.
3. Presione “SUAVEMENTE” y mantenga el émbolo de la micropipeta al nivel del primer “tope”. Sumerja lapunta (2 - 3 mm) hacia la solución de trabajo.
4. Aspire el volumen de la solución LENTA Y UNIFORMEMENTE. NO LIBERE DE UN SOLO “GOLPE” EL ÉMBOLO DE LA MICROPIPETA.

Para vertir el volumen aspirado de la solución a un contenedor:
1. Abra el contenedor al cual vertirá la solución aspirada por la micropipeta.
2. Sujete la micropipeta con una mano en posición vertical, mantenga el tubo con la otramano. Realice este procedimiento a la altura de su vista.
3. Con la punta toque la pared del tubo en donde colocará la solución.
4. Presione “SUAVEMENTE” y mantenga el émbolo de la micropipeta al nivel del segundo “tope”. Asegúrese de que todo el líquido haya salido de la punta.
5. Manteniendo el émbolo presionado, retire lentamente la micropipeta del tubo y asegúrese de NO succionar nada de...