practica 1



OBJETIVO:
Analizar la influencia de algunos factores que afectan las separaciones cromatográficas
RESULTADOS
Polaridad del disolvente
En la siguiente tabla se muestran los valores de Rf obtenidos de los colorantes Rojo de Metilo y Sudan I, que fueron colocados en cámaras cromatográficas con diferentes solventes.
Disolvente
Rf rojo
Rf sudan
AcOEt
0.72
0.88
AcOEt:hexano (1: 1)0.38
0.92
AcOEt:hexano (3:7)
0.21
0.82








Volumen de muestra
En la siguiente tabla se muestras los valores de ancho de banda (mm) obtenidos del colorante Rojo de Metilo en diferentes volúmenes, que fueron expuestas a cámaras saturadas de AcOEt: hexano (1:1).
µL
Ancho de banda (mm)
1
4
2
4
4
4

Concentración de la muestra
En la siguiente tabla se muestran los resultadosobtenidos de asimetría de banda presente o no presente en la cromatografía con colorante Rojo de Metilo y puesto en cámara cromatográfica saturada con AcOEt: hexano (1:1).
µg/mL
Asimetría (si o no)
1
No
5
Si
10
Si



Efecto de matriz
En la siguiente tabla se muestran resultados de 2 experiencias, el efecto del disolvente de la muestra y la presencia de otros analitos, amboscromatofolios puestos en cámara saturada de AcOEt: hexano (1:1).
Disolvente
Rf
Otros analitos
Rf
MeCN
0.36
NaCl
0.48
MeOH
0.41
Sacarosa
0.46
H2O
0.39









DISCUSION DE RESULTADOS
En la primera experiencia, se noto que la polaridad del disolventes es muy importante al realizar una cromatografía, pues de este depende el corrimiento. Considerando que al llevar a cabo lacromatografía en fase normal, la placa de sílica es polar, por lo que se necesitan disolventes no polares o medianamente polares, esto es para que la muestra pueda ser revelada, de lo contrario, la mancha se quedaría en el mismo lugar de aplicación; en el caso de la fase reversa, la placa es no polar, por lo que los solventes deben ser polares o medianamente polares, para que se pueda ver el corrimiento de lamancha. En esta experiencia se realizo una cromatografía en fase normal, por lo que los disolventes (AcOEt y hexano, diversas proporciones) se noto que son medianamente polares, porque hubo corrimiento de mancha. El colorante rojo de metilo y sudan I son polares, los disolventes son medianamente polares, considerando que el sudan I tuvo un Rf más alto que el rojo de metilo, entonces el coloranteSudan I es menos polar que el Rojo y mas afín a la fase móvil.
En la experiencia 2, se noto que el volumen influye en el tamaño de la mancha, aunque en nuestro caso no se aplico un volumen creciente de una sola concentración, si no que fue volúmenes crecientes pero en diferentes concentraciones, por lo que el efecto esperado no fue el obtenido, pues todas las manchas tuvieron un mismo ancho debanda.
En la experiencia 3, el efecto de la concentración se noto bien, puesto que a mayor concentración mayor “coleo”, el “coleo” es la sobrecarga de la muestra, en este caso la sobrecarga era la concentración del analito, por lo que en la concentración de 10 mg/ml nos dio una mancha con un coleo más prolongado a diferencia de la muestra con concentración de 5 mg/ml, que si nos dio un coleo peromucho menor a la concentración máxima utilizada en la experiencia.
En la experiencia 4 se noto el efecto de matriz, en el cual la naturaleza del disolvente de la muestra influye, puesto que en el caso en que el colorante Rojo de Metilo se encontraba disuelto en agua, hubo un corrimiento menor al que se encontraba disuelto en acetonitrilo, ambos son polares pero el acetonitrilo es un poco menospolar que el agua, en al caso en que la muestra estuvo disuelta en metanol, hubo mayor corrimiento, puesto que el metanol es mucho menos polar que el acetonitrilo y el agua. Por lo que en nuestro caso, no coincide el resultado entre el agua y el MeCN, pues nuestro Rf es menor q el del H2O.
En el cromatofolio donde se añadió sacarosa y NaCl, se nota como se separan los diferentes componentes de la...