practica 12 Fisiologia


INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas


FISIOLOGÍA VEGETAL

PRÁCTICA 12. REACCIÓN DE HILL

EQUIPO: 8


Alumnas:
Hernández Enríquez Adriana Monserrat
Hernández Martínez Jessica Viridiana


Grupo 30V1

Fecha de entrega: 6/febrero/15




INTRODUCCIÓN
En 1939, Robin Hill observó que, al iluminar unasuspensión de cloroplastos los cuales son, son orgánulos subcelulares(plastidios) verdes.que están presentes en las células mesofílicas de las hojas o en cualquier otro tejido vegetal con capacidad fotosintética. Estos pueden desprender O2 en presencia de luz, si se suministra un compuesto oxidado capaz de aceptar electrones procedentes de la fotolisis del agua. De esta forma, el proceso dedesprendimiento de O2 en la fotosíntesis puede ser separado del de la fijación de CO2 (Kozuleva e Ivanov, 2010)

Este es el proceso que tiene lugar durante la fase lumínica de la fotosíntesis, en la que el aceptor de electrones es el NADP.

En la hoja los principales aceptores naturales de electrones son la ferredoxina y el NADP, pero se inactivan durante el proceso de aislamiento de los cloroplastos.“in vitro”, estos aceptores naturales pueden sustituirse por el 2,6 diclorofenolindofenol (DCPIP). Este compuesto es azul intenso en forma oxidada (quinona) pero se decolora lentamente cuando se reduce (fenol).
La reacción que tiene lugar es la siguiente:

Luz
Cloroplastos + DCPIP (azul intenso)+ H2O
Cloroplastos + DCPIP-H (azul pálido)+ ½ O2


Este hallazgo fue un hito en el estudio de lafotosíntesis, ya que fue uno de los primeros indicios de que la fuente de electrones en las reacciones de luz es el agua, y se confirmó que el oxígeno desprendido proviene de agua en lugar de a partir de dióxido de carbono.
Además, se mostró que un componente significativo de las reacciones luminosas puede ser estudiado in vitro utilizando cloroplastos aislados. La reacción de Hill se defineformalmente como la reducción de un aceptor de electrones (A) por electrones y los protones de agua, con la evolución de oxígeno, cuando los cloroplastos son expuestos a la luz


OBJETIVO
Demostrar la actividad fotolítica de los cloroplastos en la reacción de Hill






Desarrollo
Para realizar la práctica se hizo la suspensión de cloroplastos de los hojas de espinaca y zebrina. Se utilizaron ochotubos en los cuales se agregó primero 0.5ml de Regulador de fosfatos, 0.3ml de DCPI y 0.3ml de la solución de cloroplastos a excepción de un tubo el cual seria el testigo. Cada tubo lo cubrimos para evitar el contacto con la luz. Después de agregar la primera dilución de suspensión de cloroplastos en el tubo, este se destapo y se colocó en condiciones de luz; cada tres minutos se destaparon lostubos y se colocaron en esta misma condición, solo seis tubos y el testigo cumplieron con este procedimiento de tal manera que el ultimo tubo se mantuviera en obscuridad 15 minutos y en luz 0 minutos; el penúltimo 12 en obscuridad y 3 en luz y así sucesivamente; el último tubo lo colocamos en un baño María a ebullición.
Resultados
Tabla 1. Resultados. Cada + representa el momento en el que empezó ahaber un cambio en cada tubo respecto a la reacción.
Tiempo
Tubo T
Tubo 1
T2
T3
T4
T5
T6
Ebullición
0
-
+






3
-

+





6
-


+




9
-



+



12
-




+


15
-





+



Imagen 1. Tubos que se colocaron por orden de tiempo en el medio con luz.





Imagen 2. Tubo que se colocó en el medio a temperatura de ebullición.


Discusión
La reacción de Hill se demuestra con el DCPIP (2,6diclorofenolindofenol). En estado oxidado, este colorante es azul, mientras que reducido no tiene color. Las moléculas del colorante interceptan los electrones en la cadena fotosintética; específicamente acepta dos electrones en lugar de que vayan a P680, por lo que la pérdida del color demuestra que el flujo de electrones está ocurriendo durante las reacciones dependientes de la luz. Dicha pérdida es...