Practica 12

PRACTICA Nª11
AISLAMIENTO DE DNA DE ESPINACA
OBJETIVO:
Conocer y realizar un procedimiento de purificación del DNA de espinaca.
Obtener el espectro de absorción característico del DNA.INTRODUCCIÓN:
En la naturaleza el DNA se localiza en el núcleo de las células eucariotas en forma de desoxirribonucleoproteína. El aislamiento requiere su extracción de la célula y posterior separación de laproteína asociada. Los métodos más empleados en el aislamiento del DNA varían según la naturaleza biológica del material implicado. Un método general incluye rotura de células, desnaturalización derestos celulares y, separación de RNA por ribonucleasa seguida de precipitación selectiva de DNA con isopropanol.
ANALISIS DE LA TECNICA:
TRIS: Amortiguador de pH (8.5), para que la carga neta delgrupo fosfato del DNA sea (–)
EDTA: Agente quelante, forma complejos con iones de metales divalentes(los precipita)
NaCl: Hidrata la pared celular (celulosa=polisacárido) y así poder romper la paredcelular con la trituración.
Amilasa: Enzima hidrolasa, para degradar almidón.
NaCl (Sol. Saturada): Para desproteinizar proteínas encontradas en el homogeneizado
SDS: Rompe enlaces no covalentes delas proteínas (desnaturaliza)
Cloroformo: Alcohol Isoamílico (24:1): la proteína forma un gel en la interfase cloroformo-agua mientras que el DNA permanece en la fase acuosa.
RESULTADOS:ESPECTRO DE ABSORCION ADN |
LONGITUD () | ABSORBANCIA |
200 | 0.129 |
205 | 0.203 |
210 | 0.124 |
215 | 0.124 |
220 | 0.195 |
225 | 0.208 |
230 | 0.163 |
235 | 0.213 |
240 | 0.229 |
245| 0.310 |
250 | 0.518 |
255 | 1.027 |
260 | 1.162 |
265 | 1.133 |
270 | 1.029 |
275 | 0.891 |
280 | 0.745 |
285 | 0.587 |
290 | 0.456 |
295 | 0.352 |
300 | 0.288 |

DISCUSIÓN:En la espinaca podemos encontrar más puro el DNA ya que no contiene tanto almidón como en el caso de la guayaba además la técnica utilizada permitió obtener el DNA con una baja concentración de...