Practica 2 Lab

Fraccionamiento y purificación de proteínas presentes en el suero sanguíneo y análisis de sus propiedades mediante fotocolorimetría
Johana Badillo Mejia1* Joaquín Guerra Alvez2*
1 Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Ciencias. Ingeniería Biológica. Calle 59 A No. 63 – 20 Núcleo el Volador, 2Universidad nacional de Colombia. Facultad de minas. Ingeniería química. Carrera 80 No 65-223- Núcleo Robledo Medellín Colombia. *Autor para correspondencia:1: jmbadillom@unal.edu.co 2: jogguerraal@unal.edu.co
Resumen
En la practica de laboratorio se realizó la determinación de proteínas totales, globulinas y de albúmina de una muestra de suero sanguíneo desconocido, por medio de un análisis de espectro de absorción y utilizando la ley de Beer para hallar estas concentraciones paraluego compararlas con los valores normales fisiológicos. Para esto se utilizaron dos métodos uno por comparación con una solución patrón de albúmina y otra por medio de una curva de calibración. Para la comparación con la solución patrón de albúmina se prepararon dos soluciones, una con las proteínas totales que contenían suero sanguíneo y una solución salina de cloruro de sodio. La otra fue lasolución de globulinas obtenidas del suero sanguíneo, estas globulinas se obtuvieron después de utilizar el efecto de la concentración salina sobre la solubilidad de las proteínas y separadas por precipitación. Para medir la absorbancia de estas muestras se ajusto el fotocolorímetro a 540 nm y luego de tomar los datos se procedieron a realizar los cálculos para hallar las concentraciones dando comoresultado un 1.98 % para las globulinas las cuales se encuentran en el nivel normal y un 8.6 % para proteínas totales y 6.6 % para albúmina, estos dos últimos valores se encuentran por fuera del nivel normal por lo cual hay que pasar a analizar el porqué de estos resultados.
Palabras Claves: Globulinas, Salting-in, Salting-out, Curva de Calibración, Ley de Beer, Fuerza Iónica, Precipitación.Introducción
Actualmente la medicina precisa para la detección temprana de ciertas enfermedades análisis como la cuantificación de proteínas en el cuerpo, analizando la sangre o la orina de los pacientes. Las proteínas son macromoléculas formadas por aminoácidos esenciales y no esenciales unidos por cadenas polipeptídicas que cumplen varias funciones en los organismos de los seres vivos, debido a queestán relacionadas con todos los procesos biológicos que ocurren dentro de ellos. Cumplen funciones estructurales como la formación de membranas, ayudan en el enrollamiento de cromosomas, la formación de queratina, hormonas, proteínas plasmáticas, hemoglobina, vitaminas, enzimas, entre otras; también esenciales para el crecimiento, el transporte de oxigeno y dióxido de carbono, y son la forma deexpresión de la información genética en los organismos. Las proteínas pueden ser según su composición: simples o conjugadas (cadenas enlazadas covalentemente con otros grupos prostéticos). Según su nivel estructural, se clasifican en primarias (secuencias de residuos de aminoácidos), secundarias (conformación estabilizada por puentes de hidrogeno), terciarias (forma compactada de la cadenapolipeptídica) o cuaternarias (ensamble de dos o mas cadenas polipeptídicas) y gracias a esto se encuentran en las proteínas dos tipos de formas, fibrosas: presentan largos filamentos, de forma cilíndrica, con estructuras secundarias bien definidas, inertes e insolubles el agua, funcionan como proteínas de almacenamiento o estructurales; y las globulares: su cadena polipetídica de enrolla sobre si,formando estructuras terciarias y cuaternarias dando una forma casi esférica y compacta. Las proteínas encontradas en el suero sanguíneo, son llamadas proteínas totales, y son la suma de la globulina (concentración en la sangre de 1,8 – 3,5 g/100ml) y la albúmina (concentración en la sangre de 3 – 4 g/100ml) presentes en él. Su identificación se hace para diagnosticar problemas nutricionales,...