Practica 2

MODULO: ENERGIA Y CONSUMO DE SUSTANCIAS FUNDAMENTALES.

REPORTE DE LA PRACTICA 2: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS.
METODO DE BIURET

GRUPO: BC-114A

INTEGRANTES:
* AGUILAR AGUILAR ARIADNA
* GUZMAN ZACATENCO ALEJANDRA
* LIRA LEON LAURA
* ROMERO BALLESTEROS BRENDA.

TRONCO COMUN DIVISIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD.
MODULO: ENERGIA Y CONSUMO DE SUSTANCIASFUNDAMENTALES.
REPORTE DE LA PRACTICA No. 2
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS.
METODO DE BIURET
El día 29 de junio del 2011 asistimos al laboratorio 2 a las 9:00 de la mañana, se hizo limpieza del área de trabajo y le toco a nuestro equipo pedir el material de laboratorio que ocuparíamos el grupo entero.
Hicimos entrega, a todos los equipos, del material que ocuparíamos durante la práctica, así como de lassustancias con las que estaríamos trabajando, después de que entregamos los materiales organizamos nuestros materiales para poder comenzar a trabajar en la práctica.
Enumeramos 6 tubos de 15 x 100 del 1 al 6 y a cada uno se les vertieron las soluciones de acido acético y acido de sodio, según se muestra en la siguiente tabla:

TUBO | Solución ácido acético 0.1 N | Solución acetato de sodio0.1 N |
1 | 5 ml | |
2 | 4 ml | 1 ml |
3 | 3 ml | 2 ml |
4 | 2 ml | 3 ml |
5 | 1 ml | 4 ml |
6 | | 5 ml |
Esto se hizo para la determinación del punto isoeléctrico.

ROTULACION DE LOS TUBOS Y AGREGACION DE LAS SOLUCIONES EN ELLOS.
Mientras se colocaban estas soluciones en los tubos, colocamos en un vaso de precipitados de 100 ml los 6 gr de leche en polvodescremada y se le agregaron poco a poco 50 ml de agua destilada para hidratarla; de esta solución se tomaron 2 ml y se coloco en un tubo de ensayo de 16 x 150 mm y se le vertieron 8 ml mas de agua destilada para diluirla, a este tubo se le coloco con cinta masking 1:5 para poder identificarla ya que la usaríamos más adelante para el punto isoeléctrico.

PREPARACION DE LA LECHE
Añadimos 1 ml deleche diluida a cada uno de los 4 tubos que contenían 5 ml de una combinación de acido acético y acetato de sodio y también se les añadió 1 ml de leche diluida al tubo número 1 que solo contenía acido acético y al tubo 6 que solo contenía acetato de sodio, se agitaron cuidadosamente y se dejaron reposar por 10 minutos.

DILUCION DE LA LECHE TOMA DE LECHE PARAAGREGAR A LOS TUBOS CON LAS SOLUCIONES

Revisamos los tubos, de los cuales los que estaban marcados con los números 1,5 y 6 se encontraban sin grumos y la sustancia estaba completamente diluida mientras que en los tubos 2, 3 y 4 se encontraban con grumos o sedimentos al fondo del tubo.


TUBOS EN REPOSO

COMPARACION DE UN TUBO SEDIMENTADO CON UNO QUE PRESENTABA GRUMOSBalanceamos los tubos y los colocamos en la centrifugadora por 10 minutos a 2500 r.p.m.
Marcamos los tubos limpios de 15 x 100 del 1 al 6 y colocamos ahí el sobrenadante
Marcamos los tubos de 16 x 150 del I al IV, marcamos uno como al cual solo se le aplico 1ml de agua con el objetivo de crear un blanco de reactivo para así poder calibrar el espectrómetro.

CENTRIFUGA CON LOS TUBOS DE ENSAYEADICION DE REACTIVO DE BIURET
A los tubos marcados del I al IV se les colocó caseína y se les agregó agua destilada, mientras que a los tubos marcados del 1 al 6 que tenían el sobrenadante se les aplicó agua destilada, a todas las muestras se les aplicó el reactivo de Biuret, las cantidades de solución que les aplicamos se muestra en la siguiente tabla:
Tubo | 0 | I | II | III| IV | V | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Solución Patrón 4 mg/ml | 0 ml | 0.2 ml | 0.4 ml | 0.6 ml | 0.8 ml | 1 ml | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Sobrenadante | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.5 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Sobrenadante | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.5 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Sobrenadante | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0.5 | 0 | 0 | 0...