Practica 2

Practica 2.
Tinción de gram


Introducción:

Objetivo
Distinguir entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas, presentes en una muestra de cavidad oral.
Objetivos particulares
1.Recolectar la muestra de manera adecuada
2. Realizar un frotis
3. Observar con el microscopio.
Fundamento
Se basa en que las diferencias químicas en las paredes celulares de las bacterias, permiten o nola salida del complejo cristal violeta-yodo. Las bacterias Gram positivas tienen una pared celular gruesa, compuesta principalmente por peptidoglicano, mientras que en Gram negativas, aunque lapared está también constituida por péptidoglicano, es más delgada y presenta además una membrana externa con lipopolisacáridos. Las paredes de las bacterias Gram positivas tratadas con alcoholsufren una deshidratación y sus poros se contraen, dificultando la salida del complejo cristal violeta-yodo. En las Gram negativas, el alcohol desorganiza la capa lipídica más externa y lava elcolorante de la delgada capa de peptidoglicano.
Materiales, equipo y reactivos
1 Hisopo estéril
6 portaobjetos
1 Piceta o Frasco lavador
1 Puente de tinción
1 microscopio
Cristal Violeta,
LugolSafranina.
Alcohol-Cetona.
Agua destilada

Técnica
1. Preparar una extensión (frotis) por alumno, de la muestra recolectada (extender, secar y fijar con calor).
2. Colocar el frotis en el puente de tinción3. Cubrir la preparación con Cristal Violeta por 60 segundos
4. Enjuagar suavemente con agua destilada.
5. Cubrir la preparación con Lugol por 60 segundos.
6. Enjuagar suavemente con agua.
7.Cubrir la preparación con Alcohol-Cetona durante algunos segundos (5-10)
8. Enjuagar suavemente con agua.
9. Cubrir la preparación con Safranina por 30 segundos
10. Enjuagar suavemente conagua.
11. Secar
12. Observar en 100x (inmersión).

Resultados,
Discusión,
Conclusiones,
Bibliografia,
Anexos: (Mapa conceptual de la introducción, Diagrama de flujo del método, Autoevaluación)