PRACTICA 3 1


Practica: N°3 “PRECIPITACIÓN, SEPARACIÓN Y PUNTO ISOELÉCTRICO DE PROTÉINAS”. Sección: N°4 . 3FM2.
Corona Velázquez Clara. García García Ana Alicia.Serrano Guillén Nelly Alejandra
Introducción:Cualquier factor que modifique la interacción de la proteína con el disolvente disminuirá su estabilidad en disolución y provocará la precipitación. Así, la desaparición total o parcial de la envolturaacuosa, la neutralización de las cargas eléctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrógeno facilitarán la agregación intermolecular y provocará la precipitación. Una purificaciónde proteínas es una serie de procesos que permiten aislar un sólo tipo de proteína de una mezcla compleja. La purificación de proteínas es vital para la caracterización de la función, estructura eninteracciones de la proteína de interés. El Punto  Isoeléctrico (IEP) está definido como el pH en el cual las cargas positivas igualan a las cargas negativas y no existe movimiento en un campoeléctrico.

Objetivos:
Analizar la solubilidad de proteínas mediante los factores fisicoquímicos que reaccionan en ellas.
Obtención del punto isoeléctrico de la insulina partiendo de los valores de pH y lasolubilidad que presenta en el medio, ya sea Ácido o Básico.
Resultados:
TABLA 1. RESULTADOS DEL SALTING – OUT

TABLA 2. PRECIPITACIÓN POR EFECTO DEL pH Y SOLVENTES

TABLA 3. PRECIPITACIÓNPOR METALES PESADOS
TUBO N°
1
2
3
4
5
Clara de huevo filtrada dil. 1:3 (mL)
1.00
1.00
1.00
1.00
1.00
HgCl2 5%(mL)
0.25
-
-
-
-
AgNO3 2% (mL)
-
0.25
-
-
-
Pb(C2H3O2 )2 5% (mL)
-
-
0.25
-
-
NaCl 5%(mL)
-
-
-
0.25
-
H2O (mL)
-
-
-
-
0.25
Observaciones
Opale-cente
Opale-cente
Opale-cente
Se aclaro
No cambio

TABLA 4. DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOÉLECTRICO DE LA INSULINA

N°
AcidoAce-tico
C2H3NaO20.2 M (mL)
Insulina
40 U/mL
pH
Observaciones
1
0.23
0.02
6 U (0.06 mL)
3.679
No precipito
2
0.15
0.10
6 U (0.06 mL)
4.563
No precipito
3
0.05
0.20
6 U (0.06 mL)
5.342
Precipito
4
0.01
0.24
6 U...