practica 4 microcc

UNIVERSIDAD DE SONORA
DIVISIÓN DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y DE LA SALUD
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS


LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA


Reporte 4
PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL Y MEDIOS DE
CULTIVO


PROFESORA
GRICELDA NUÑEZ MEJIA


EQUIPO 9
Carolina Coronado Salazar
Oneyda Trejo Ibarra



Hermosillo, Sonora MARTES 29 DE SEPTIEMBRE 2015Objetivo

Que el alumno se involucre en la preparación de algunos medios de cultivo y materiales para el cultivo de microorganismos, así como en la técnica para su esterilización por vapor húmedo.
Material

Matraz Erlen Meyer de 500 mL
Probeta de 100 mL
Mechero Bunsen
2 tubos de 13X100/con tapón de rosca
Pipeta serológica de 10 mL
Guantes y cubrebocas
Agar Sabouraud
Agar nutritivo
Medio SIM
Caldo BHIIntroducción
Para estudiar y conocer a los microorganismos, sean éstos bacterias u hongos; es necesario aislarlos y cultivarlos de manera in vitro. Para lo cual se debe disponer de medios de cultivo que favorezcan su desarrollo, para realizar esto, es necesario que todo material que se emplee esté rigurosamente esterilizado (eliminación completa de cualquier forma de vida) para evitarcontaminaciones y por consiguiente, resultados erróneos. La elección del método depende de la naturaleza física del material que se va a esterilizar y del uso que se le piensa dar (Madigan y col., 2009).
El método más empleado para esterilizar medios de cultivo, soluciones, cantidades medias de agua en tubos o botellas, materiales de cristalería, etc., es a través de la esterilización por vapor. El vapor apresión es un agente esterilizante debido a que se alcanzan temperaturas superiores a las alcanzadas por ebullición, además del poder de penetración comparado con otros métodos, el resultado de lo anterior es la desnaturalización de proteínas. El equipo de laboratorio diseñado para esterilizar por este método, se llama autoclave, consiste en una doble cámara que puede saturarse de vapor y mantenerse auna determinada presión y temperatura durante un tiempo largo. Es importante que el aire de la cámara sea reemplazado por completo por vapor saturado. Si hay aire presente, se alcanzará una temperatura inferior. Generalmente se opera a una presión de 15 lb/pulg2 (121° C). El tiempo de operación depende de la naturaleza del material por esterilizar, del tipo de recipiente y del volumen (Madigan ycol., 2009).

Procedimiento
Preparar: 2 placas con agar Sabouraud, 2 placas con agar nutritivo, un tubo con medio SIM y un tubo con caldo BHI, por equipo.
El material de vidrio, lavar con agua y jabón, enjuagar con agua de la llave y al final con agua destilada.
1. Es importante antes de empezar a preparar cualquier medio de cultivo, leer cuidadosamente las instrucciones del frasco contenedor delmedio.
2. Pesar el medio de acuerdo a las instrucciones y a la cantidad a preparar.
3. En el matraz Erlen Meyer, agregar una pequeña cantidad conocida de agua destilada y se le adiciona el medio de cultivo pesado, se le agrega el resto de agua de acuerdo a la cantidad de medio de cultivo a realizar. (Nota: se recomienda que el matraz sea del doble de la capacidad del volumen del medio apreparar).
4. Calentar lentamente con agitación continua, hasta que el medio se observe homogéneo ( transparente, no turbio y sin grumos en las paredes del matraz ), cuidando que no se queme ni se derrame. Tapar con algodón y gasa.
5. Los medios que van en tubo agregar al mismo, dejando el tapón flojo sin riesgo de caer, para permitir que el vapor entre.
6. Comprobar el nivel de agua de la autoclave yasegurar que el dren se encuentre bien cerrado. Colocar en su interior el material permitiendo la correcta distribución del vapor de agua. Para ello se deben tomar las siguientes precauciones:
a) Distribuir el material en forma ordenada en toda la superficie interna disponible.
b) Evitar acumular el material en un área específica. No colocar el material uno sobre otro.
c) Evitar que el material toque...