Practica 5 De Micologia

UNIVERSIDAD DE SONORA
Laboratorio de Micología
Práctica #5.
Estudio de microcultivos de hongos
Equipo #6 (Lunes de 6:00pm a 7:00pm)

Ibarra Valenzuela, A.P. Rodríguez Lares G.

RESUMEN
Una vez que se tiene la obtención de la cepa pura del hongo de interés, el siguiente paso para cumplir a cabalidad con el segundo postulado de Koch, el cual es la identificación del agente causal y unaherramienta más para cumplir con este objetivo, es la técnica de microcultivo; con esta técnica se obtienen las distintas fases del ciclo de vida de los hongos, las cuales son esenciales para su identificación. En una caja Petri estéril se instaló un soporte para posicionar una cuadro de 1.5 cm2 de agar papa dextrosa, y se vacío 8 mL de glicerol. Posteriormente se inoculo el hongo del géneroCladosporium sp, posicionando el asa en los cuatro lados laterales del agar y se colocó un cubreobjetos sobre el mismo, se incubo en una estufa a temperatura ambiente en anaerobiosis por una semana. Se tomó el cubreobjetos que se encontraba encima del agar al cual se le agregó una gota de Azul de Algodón y se posiciono en un portaobjetos, así mismo se le agregó una gota de Azul de Algodón al cuadro conAgar y a este se le coloco un cubreobjetos, se procedió a la observación a 40 x. En el microcultivo se observó, macroscópicamente, el crecimiento de colonias de color negro en las orillas del cuadro del agar. Microscópicamente se observaron conidios en orden catenuladas, pequeñas y redondas, se obtuvo una magnifica imagen de estructuras características de Aspergillus niger . Se puede inferir,entonces, que al momento de realizar la inoculación en el sistema no se tuvo las precauciones adecuadas de esterilidad o que el medio se contaminó durante su incubación, predominando el crecimiento de A. niger sobre Cladosporium sp.

INTRODUCCIÓN
Cuando se corta con el asa micológica un fragmento de una colonia micelial y se transfiere a un portaobjetos o incluso si se emplea la técnica del celo,con frecuencia las estructuras se alteran y fragmentan y no pueden visualizarse intactas, lo que impide la correcta identificación del hongo, aunque permite la diferenciación entre hongos filamentosos inferiores y superiores.
Para obviar este hecho y poder observar sin distorsión el micelio y las estructuras de reproducción asexual, es preferible recurrir al microcultivo. Esta técnica permite laobservación de las estructuras microscópicas de los hongos filamentosos, en particular las esporas asexuales, sin alteración de las mismas. Es un sistema adecuado para demostrar los finos aspectos microscópicos necesarios para realizar la identificación definitiva de algunos hongos o para preparar montajes semipermanentes que pueden usarse en la enseñanza.

METODOLOGÍA
Realización del microcultivo
Enla base de la caja Petri con el medio agar papa dextrosa, trazar con un marcador una cuadrícula cuyos lados midan aproximadamente 1.5cm. Con una navaja previamente mojada en alcohol, flameada y enfríada, cortar el agar siguiendo las líneas marcadas de la cuadrícula. Colocar en la aja Petri estéril la varilla de vidrio, sobre ésta ponga el portaobjetos y encima de él coloque en el centro, elcuadrito de agar (Figura 1). Con el alambre tomar unas esporas de la colonia e inocular en los cuatro lados de cuadro de agar. Con las pinzas pasadas por la flama, colocar el cubreobjetos para que se adhiera al agar. Con una pipeta estéril agregar 8mL de glicerol en la caja de Petri, procurando no mojar el microcultivo. Incubar a temperatura ambiente por 4 o 5 días. Después de este tiempo retirar elmicrocultivo y observarlo al microscopio.


Figura 1. Ejemplo del sistema para el microcultivo

RESULTADOS
En el microcultivo se observó, macroscópicamente, el crecimiento de colonias de color negro en las orillas del cuadro del agar. Al observar directamente el sistema al microscopio, se lograron observar las hifas producidas del hongo filamentoso (Imagen 1).










Imagen 1. Hifas producidas...