Practica 5

Páginas: 8 (1769 palabras) Publicado: 13 de junio de 2012
* Introducción

Todos los seres vivos requieren un continuo aporte de nutrientes para suplir sus necesidades de materia y energía. El principal nutriente de la célula es la glucosa, la que es catabolizada para producir ATP, la forma más importante de energía utilizable en la célula. El metabolismo de la glucosa ocurre a través de una serie de reacciones:

Glucólisis: Glucosa → piruvato, ATPCiclo de Krebs: Acetil CoA → CO2 + NADH +H+ +FADH2 +ATP
Cadena respiratoria: NADH, H+, FADH2 + O2 → ATP + H2O

En ausencia o deficiencia de oxígeno, tienen lugar la glucólisis anaeróbica o fermentación, en que el piruvato (producto de la glucólisis) se transforma en etanol (levaduras) o ácido láctico (músculo).

En presencia de oxígeno suficiente, el piruvato se incorpora a lamitocondria y se transforma en Acetil CoA, el cual a través del ciclo de Krebs origina CO2 y coenzimas reducidas. Estas coenzimas reducidas se incorporan a la cadena respiratoria mitocondrial, donde son reoxidados por O2, produciendo ATP y H2O. Esta vía aeróbica es la principal producción de ATP.

* Primera parte: Fermentación alcohólica

La fermentabilidad del azúcar correspondiente se pone demanifiesto por determinación cuantitativa del CO2 formado en un sacarómetro de Einhorn. Estudiando los azúcares que pueden ser fermentados por la levadura (Saccharomyces cerevisiae).

* Material y reactivos

* Levadura (Saccharomyces cerevisiae)
* Glucosa, manosa, galactosa
* Sacarosa, lactosa
* Extracto de levadura (0,6g)
* Dihidrógeno fosfato potásico (0,5g)
* 1matraz erlenmeyer (250 ml)
* 1 gradilla
* 1 probeta (100 ml)
* 4 tubos de fermentación (sacarómetros de Einhorn)
* 3 vasos de precipitados (100 ml)
* Varillas de vidrio, espátula, cucharilla
* Agua destilada
* Incubadora
* Báscula

* Procedimiento experimental

1. Preparar la solución fermentadora y la suspensión de levaduras según se indica en acontinuación:
Solución fermentadora: añadir el extracto de levadura (6 g/l) + 0,5 g de dihidrogenofosfato potásico + 100 ml de agua en el matraz Erlenmeyer de 250 ml.
Suspensión de levaduras: Suspender por agitación 10 g de levadura + 100 ml de solución fermentadora. Incubar 15 min a 37ºC antes de llevar a cabo el experimento
2. Rotular los tubos de ensayo y los tubos de fermentación (C=control, G = glucosa, GL = galactosa, F = fructosa, L= lactosa, S= sacarosa) (cada grupo dispondrá de 3 azúcares diferentes).

3. Llenar cada tubo de ensayo con 1 g del azúcar correspondiente + 10 ml de agua. El control sólo 10 ml de agua.
4. Pasar 10 ml de suspensión de levadura a cada vaso de precipitados.
5. Añadir 5 ml de la solución del azúcar correspondiente.
6. Llenar lostubos de fermentación con la solución levadura-azúcar: añadir la solución a la parte esférica del tubo, girar y golpear ligeramente los tubos de fermentación hasta que se llene la rama cerrada.
7. Colocar los tubos de fermentación a temperatura ambiente
8. Medir el volumen de gas (CO2) al cabo de 15, 30, 40, 50, 60, 120 min.
FRUCTOSA | Es un monosacárido que se encuentra en la víaglucolítica, y por tanto fermenta al igual que ocurre con la glucosa. |
LACTOSA | No fermenta, puesto que la levadura de estudio, no dispone de lactasa y por tanto no es posible la hidrólisis del disacárido, ya que si se produjera ésta la glucosa fermentaría. |
GLUCOSA | Fermenta, debido a que es un monosacárido que nuestro organismo de estudio es capaz de sintetizar. |
GALACTOSA | No se puedepasar de D-galactosa a D-glucosa, que sería por medio de la 4-epimerasa, por lo que podemos decir, que nuestro microoganismo no tienes esta enzima ya que no fermenta. |
SACAROSA | Fermenta, debido a que es un disacárido cuya hidrólisis por medio de la sacarasa(enzima que encontramos en nuestro microorganismo de estudio) da fructosa y glucosa, ambos fermentativos. |

* Segunda parte: Ciclo...
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