Practica 6 Bio





Centro de Ciencias Básicas

Departamento: Química


Carrera: Médico Cirujano


Nombre: E.M. José Manuel Tavera Alvarez.


Grupo: 1º “B”


Materia: Laboratorio de bioquímica


Práctica 6: “Determinación de una proteína por el método de Biuret”

Fecha: 13 de octubre de 2013.
Objetivos:

Determinar fotocolorimétricamente la concentración de una proteína de una solución problema usando unacurva estándar.
Introducción:

Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiación se puede estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino también en ultravioleta e infrarrojo. La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujode cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de energía.

Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda o como elconjunto de procedimientos que utilizan la luz para medir concentraciones químicas.

Es conveniente describir la luz a la vez en términos de partículas y ondas. Las ondas de la luz constan de campos eléctricos y magnéticos, que oscilan en planos perpendiculares entre si. En esta figura el campo eléctrico se encuentra en el plano xy, y el campo magnético en el plano xz. La longitud de onda, es ladistancia entre las crestas de dos ondas. La frecuencia, v, es el número de oscilaciones completas de una onda en un segundo. La unidad de frecuencia es el inverso de los segundos, s 1. Una oscilación por segundo también se llama hertzio (Hz). La relación entre frecuencia y longitud de onda es: donde c es la velocidad de la luz (2,998 x 108 m/s en el vacío). En un medio distinto del vacío, lavelocidad de la luz es cln, donde n es el Indicé de refracción de ese medio.

Para longitudes de onda en el visible la mayoría de las sustancias tienen n > 1, de modo que la luz visible se propaga más lentamente a través de la materia que en el vacío. Cuando la luz atraviesa dos medios con diferentes Índices de refracción, la frecuencia permanece constante, pero varia la longitud de onda.
Desde elpunto de vista de la energía, es más conveniente concebir la luz como partículas, llamadas fotones. Cada fotón transporta la energía, E, dada por E = h v donde h es la constante de Planck (6,62618 x 10 34 J/s).

Cuando una molécula absorbe un fotón, su energía aumenta. Se dice que la molécula ha pasado a un estado excitado. Si una molécula emite un fotón, su energía disminuye. El estado de máximaenergía de una molécula se llama estado fundamental. La radiación de IR estimula el movimiento vibraciones de las moléculas cuando la absorben, y las radiaciones visibles y UV hacen que los electrones pasen a orbitales de mayor energía. Los rayos X y la radiación UV lejano rompen enlaces químicos y ionizan moléculas. Los rayos X que se utilizan en medicina dañan el cuerpo humano y deben ser reducidosal mínimo.

La transmitancia, T, se define como la fracción de la luz incidente que pasa a través de la muestra: T = P/P0. Por tanto, T puede valer de O a 1. El porcentaje de transmitancia es simplemente 100T y puede valer desde 0 a 100%. La absorbencia se define como A = log10 (P/P0) = -log T.
Cuando no se absorbe luz, P = P0 y A = O. Si se absorbe el 90% de luz, se transmite el 10%, y P =P0/10. Este cociente vale A = 1. Si solamente se transmite el 1 % de luz, A = 2. La absorbencia a veces también se llamaba densidad óptica. La absorbencia es importante porque es directamente proporcional a la concentración, c, de la especie que absorbe la luz en la muestra

A = Ebc

La ecuación anterior, que es el fundamento de la espectrofotometría, tal como se aplica en química analítica, se...