PRACTICA 6

PRACTICA 6
Observación de Bacterias
Tiempo estimado de duración 2 horas
Objetivo:
Conocer e identificar las bacterias en base a la tinción y estructura que presentan estas.
GENERALIDADESSe denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en lapreparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten laobservación al microscopio de las bacterias.
En la tinción de Gram, el cristal violeta, penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas), a través de la pared bacteriana. Ellugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con Kl (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar el yodo, y actúa de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije conmayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega,sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/ cristal violeta Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos si lo hacen. Paraponer de manifestó las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la zafranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste lascélulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
1 Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Esnecesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
2. Flamear...