Practica 7 Bioca

Practica#7: Propiedades de las proteínas y determinación del punto isoeléctrico.

Alumno: Daniel Carbajal
Matricula: 131387
Programa de ingeniería biomédica



Introducción: La carga eléctrica neta de una molécula es la resultante de las cargas de todos los grupos ionizables. Las moléculas cuya carga eléctrica neta es positiva, negativa o cero, según el pH del medio, se denominan anfolitos.Pueden ser aminoácidos, nucleótidos o proteínas, y todas ellas tienen propiedades especiales con respecto a las técnicas de separación electroforéticas.
El pH al cual su carga eléctrica neta es cero recibe el nombre de punto isoeléctrico (PI). Si el pH del medio es superior al punto isoeléctrico, la carga eléctrica de la molécula será negativa y se moverá hacia el ánodo. Si el pH medio es inferior alpunto isoeléctrico, la carga eléctrica de la molécula será positiva y se moverá hacia el cátodo: la mayor parte de las técnicas electroforéticas se realizan a un pH constante (por medio de una disolución tampón), al cual la mayor parte de los componentes que se quieren separar tiene la carga eléctrica neta óptima para llevar a cabo dicha separación. (Fuentes, X. 1998).

Una proteína tienemúltiples grupos acido-base, lo que hace sus propiedades de solubilidad dependiente de la concentración de sal, polaridad del solvente, pH, y temperatura. Diferentes proteínas tiene diferentes propiedades de solubilidad, por lo que cuando una proteína es soluble otras precipitan. (Voet, D. 2006)

Si se agregan a una solución de proteína en agua pura pequeñas cantidades de sal, disminuye el coeficientede actividad de la proteína y su solubilidad aumenta. Este fenómeno, llamado disolución salina o salting in, se debe a las fuerzas de atracción entre los iones de la proteína y los iones de la sal. A concentración de sal baja el aumento en el logaritmo de la solubilidad de la proteína es proporcional a la fuerza iónica del disolvente. (Valcárcel, C. 1988). El salting in se explica porque al añadiruna pequeña cantidad de iones extraños se aumenta el desorden molecular, con ello la entropía se hace mayor y, no habiendo variación de entalpia, el cambio de energía libre es negativo, y esto supone una tendencia espontanea al aumento de solubilidad. Ahora bien, a concentraciones elevadas de sales muy solubles, como sulfato amónico, se observa precipitación salina o salting out de las proteínas,la cual depende de la disminución de la actividad del agua, lo que a su vez disminuye las interacciones solubilizantes entre el agua y los grupos de la proteína. Es decir, que cuando aumenta mucho la cantidad de iones extraños, la interacción proteína-proteína se hace mayor que la interacción proteína-agua, baja la movilidad de las cargas proteicas y las proteínas precipitan (Teijon, J. 2006).Objetivo: Conocer los métodos de solubilidad de las proteínas e identificar como la concentración cambia la precipitación, asi como determinar el punto isoeléctrico de las proteínas.)


Métodos:


Experimento 1: Precipitación de proteínas según la concentración de reactivo (salting in y salting out.)
Reactivo
Albumina (1mL)
Gelatina (1mL)
Peptona (1mL)
H2O
0.5
0.5
0.5
ZnSO4 (2%)
0.5
0.5
0.5CuSO4 (20%)
0.5
0.5
0.5
C2H3O2Co (2%)
0.5
0.5
0.5
C2H3O2Co (20%)
0.5
0.5
0.5
NaCl (2%)
0.5
0.5
0.5
NaCl (20%)
0.5
0.5
0.5

(Tabla 1: Muestra el primer experimento que se realizó, se usaron diversas concentraciones para estudiar las reacciones con las proteínas.)


Experimento 2: Determinación de pH para posteriormente determinar el punto isoeléctrico


tubo
H2O
Ac.
acético
0.01 N
Ac. Acético
0.1N
Ac. Acético
1.0 N
Albuminato
pH
1
8.38
0.62
0
0
1
6
2
7.75
1.25
0
0
1
5.2
3
8.75
0
0.25
0
1
5.4
4
8.5
0
0.5
0
1
5.1
5
8.0
0
1.0
0
1
4.8
6
7.0
0
2.0
0
1
4.49
7
5.0
0
4.0
0
1
4.19
8
1.0
0
8.0
0
1
3.89
9
7.4
0
0
1.6
1
3.59
10
5.8
0
0
3.2
1
3.29

(Tabla 2: En este experimento se muestra como en 10 tubos se virtio ácido acético en diferentes concentraciones y cantidades para determinar si se obtuvo...