practica 7

PRACTICA #7
CONCENTRACION DE PARASITOS POR FLOTACION
Y POR GRADIENTE DE CENTRIFUGACION.
OBJETIVO DE LA PRACTICA.
Desarrollar y comprender el fundamento de la técnica, para diagnostico de
parásitos intestinales, después de concentrarlos.
INTRODUCCION.
La concentración de parásitos por flotación en muestras fecales permite
comprobar la existencia de quistes de protozoos, huevos o larvas dehelmintos,
aún cuando estén presentes en pequeñas cantidades. Esta técnica se basa en la
propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor, para hacer flotar objetos
menos densos, como los huevos y quistes de parasitos, los cuales son colectados
en la superficie del liquido y observados al microscopio. La tecnica de
concentration con sulfato de zinc proporciona una suspension de parasitosmuy
limpia y es muy Buena para la recuperación de quistes de protozoarios y de la
mayoría de los huevos de helmintos. Aunque no es muy usada en forma
rutinaria, por su sencillez se puede utilizarse en encuestas.
El método de Faust, con ZnSO4, es uno de los más utilizados, aunque es poco
eficaz para huevos pesados como los de Tremátodos o como los huevos nofértiles de Ascaris. Tampoco es muyefectivo para muestras de heces ricas en
grasas. Este método puede realizarse en muestras recientes, refrigeradas o
fijadas con formol (5% ó 10%).

MATERIALES Y METODOS.
I . Concentración por flotacion
Método de Faust, con ZnSO4.:
Además del especimenol positiva, proporcionada por el profesor.
*Las heces son potencialmente infectantes. Se deben extremar las precauciones
durante todo elprocedimiento.
1. Con un abatelenguas se toma aproximadamente 1 g de heces (el tamaño de
un cacahuate) y se deposita en un vasito que contenga de 10 a 15 ml de agua de
la llave y se mezclan con un aplicador de madera.
2. La suspensión se filtra a través de una coladera o malla y se recibe el fltrado en
un tubo de centrífuga de 14 ml. Se le adicionan 1-2 ml de éter. Se tapa con un
tapon de huley se agita vigorosamente. Se adiciona agua hasta que la muestra
quede a 1cm por debajo del bordo superior del tubo.

3. Se centrifugua por 45 segundos a 2500 rpm. Debe romperse a cualquier
acúmulo que pudiera haberse formado en la parte superior y se decanta el
sobrenadante.
4. Se Añaden 2 a 3 ml de agua de la llave y se agita para resuspender el
sedimento. Se resuspende nuevamente elsedimento, adicionando agua de la
llave poco a poco, hasta que quede la muestra a 1 cm del borde superior del tubo.
Se centrifuga de nuevo.
5. Se decanta el sobrenadante y se agregan al sedimento 2 a 3 ml de sulfato de
zinc (dens. 1.180. Lo cual equivale a 330 g de sulfato de zinc en 1 litro de agua),
moviendo con un aplicador para resuspender. Se agrega más sulfato de zinc
hasta que llegue aunos 0.5 cm del borde superior del tubo.
6. Se centrifuga a 2300 rpm durante 2 min. y no no debe sacarse el tubo de la
centrífuga.
7. Sin sacar el tubo de la centrífuga, se recojen algunas gotas del material que
flota en la superficie con una asa de platino (se debe cuidar que el asa no penetre
demasiado bajo la superficie) o con una pipeta Pasteur.
8. Se depositan las gotas en unportaobjetos y se agrega una gota de lugol.
Enseguida se completa la preparación con un cubreobjetos.
9. Se observa al microscopio, a 10X y 40X. Es posible el hallazgo de protozoarios
y helmintos.
10. Haga dibujos detallados de las parásitos observados.
11. Compare con la literatura para identificar los parasitos.
12. Concluya cuales parásitos identificó.
13. Discuta las dificultades de la técnica
II. Concentración de quistes de parásitos (Giardia y
Cryptosporidium) por gradiente de centrifugación de CsCl a
partir de heces.
1. Colocar 1 a 2 ml de suspensión fecal acuosa en un tubo de centrifuga de 2 ml
y centrifugar a 1100 x g diez minutos. Eliminar el sobrenadante y resuspender el
sedimento en 200 microlitros de agua destilada.
2. Centrifugar a 1100 x g por diez minutos. Eliminar el...