Practica # 8: purificacion de acido benzoico por cromatografía en columna.

Practica # 8: Purificacion de Acido Benzoico por cromatografía en columna.

Objetivos
Determinar los factores que intervienen en la técnica de cromatografía en columna y utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de compuestos orgánicos.

Introduccion

La cromatografía en capa fina o en papel es una técnica para determinar el número de componentes de una mezcla ycomo una prueba preliminar para realizar una cromatografía en columna, entre otros. El proceso de cromatografía en columna se controla por cromatografía en capa fina o cromatografía en papel, de tal manera que se puede separar cada componente de la mezcla. La cromatografía en columna se usa para separar grandes cantidades de material: >100 mg. El proceso de cromatografía consta de una fase móvil(eluente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las sustancias que se deseen separar.
La cromatografía en columna es la técnica de separación e identificación de sustancias químicas, por la diferente retención que experimentan los componentes de una mezcla, al ser más o menos adsorbidos por los componentes de una fase fija situada en una columna, cuando son arrastrados por unfluido (fase móvil). Si la fase móvil es líquida hablamos de cromatografía líquida y si es gas será cromatografía de gases. El adsorbente, suele ser gel de sílice o alúmina, pero pueden ser otros.
Intervienen los fenómenos de adsorción y disolución, por consiguiente es fundamental tener en cuenta la polaridad, tanto de las sustancias a arrastrar como del disolvente, si queremos tener una buenaseparación.
El disolvente al descender arrastra las sustancias a distinta velocidad según la mayor o menor retención que experimenten, y salen de la columna a distinto tiempo.

La técnica, en forma generalizada, comprende:

 Preparación del disolvente
 Preparación de la columna
 Desarrollo del cromatograma
 Estudio del tiempo de retención
 Revelado de las sustancias separadas, si noson visibles

El tiempo de retención es un parámetro útil porque es constante cuando se reproduce el experimento en todas las condiciones, se pone en tablas y sirve para identificar compuestos; es fundamental en Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) y en Cromatografía de Gases.

En ésta práctica se llevará a cabo la separación del ácido benzóico y azul de metileno.

Parteexperimental

Material, Equipo y Reactivos


 Columna cromatográfica
 Pinza para bureta
 Soporte universal
 1Pipeta de 5 ml *
 1Probeta de 25 ml *
 Piceta de 125 ml c/eluyente
 Espátula
 Frasco p/cromatografía c/tapa
 Vaso de pp. de 100 ml
 Tubos capilares
 Vaso de pp. de 150 ml *
 5 tubos de ensaye de 13 x 100
 Vidrio de reloj
 Embudo de vidrio
 Agitador de vidrio
Baño María
 Ácido benzoico
 Acetato de etilo
 Azul de metileno
 Hexano
 Silicagel para columna
 Sulfato de sodio anhidro
 Papel filtro Whatman No. 1
 Yodo

Metodologia

Purificacion del acido bezoico
Se le preparará una mezcla sólida de ácido benzoico contaminado con azul de metileno, los cuales se separan por cromatografía en columna (0.1g de ácido benzoico con 0.01g de azulde metileno).

Para empacar la columna sujétela en el soporte con las pinzas. Si la llave es de vidrio, engrásela ligeramente y mantenga la posición de cerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón ayudándose con la varilla de vidrio, agregue 2 mL de eluente (acetato de etilo) y presione suavemente el algodón para que quede bien colocado y sin burbujas (Nota 1).

Prepare unasuspensión de 5 g de gel de sílice para columna en 10 mL de eluente y agite por 5 min, para eliminar las burbujas de aire. A través del embudo de vidrio vierta la suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme.

Abra la llave para eliminar el exceso de disolvente teniendo cuidado de no dejar la gel de sílice sin disolvente (Nota 2).

En un...