PRACTICA AMILASA

PRACTICA #21 AMILASA

Objetivo: Cuantificar amilasa por el método enzimático

Fundamento:
La amilasa es una enzima que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formarazucares simples, se produce principalmente en las glándulas salivares y en el páncreas. Cuando uno de estas glándulas se inflama derrama amilasa a la sangre y aparece elevado su nivel en el análisissérica.
Se utiliza para evaluar la función del páncreas diagnosticar la presencia de enfermedades del mismo y para controlar su evolución.
La amilasa sérica aparece elevada a las 12 horas de una lesión depáncreas para volver a la normalidad a las 48 a 72 horas. Si persiste elevada es que el problema no se ha resuelto.
Principio:
El método utiliza como sustrato un p-nitrofenilmalto-heptaosidobloqueado por etiliden. Dos enzimas indicadoras son empleadas: la glucoamilasa para escindir a los productos de la reacción de la amilasa y la alfa-glucosidasa para liberar el p-nitrofenol.
La glucosaterminal del sustrato se bloquea para prevenir la escisión por las enzimas indicadoras

G7pNP etiliden – G7-5 PnpG7pNP Glucosa + pNP-glucosido
pNP-glucosido Glucosa +pNP
etiliden – G7pNP = pNP/maltoheptaosido bloqueado
Material Biológico:
Suero

Material:
1. Material de punción (adaptador, agujas, torunda, torniquete)
2.Tubos de ensayo
3. Pipeta automática
4. Microlab
5. Centrífuga
6. Baño María o estufa bacteriológica.






Reactivos:
Reactivo 1 A:
1. Tampón pipes
2. Cloruro calcio
3. Cloruro sódicoReactivo 1 B
1. Tampon pipes
2. Etiliden G7 pNp
3. α-Glucosidasa


Técnica:
1. Encender el aparato 10 minutos antes
2. Escoger pagina de amilasa
3. Realizar puncion venosa trabajamos a 37...