Practica asa en orina

Practica #2
Validación del método analítico para la determinación de ácido acetilsalicilico en orina
Objetivo: Evaluar estadísticamente la confiabilidad del método espectrofotométrico utilizado para la cuantificación de ácido acetilsalicilico en orina.
Introducción:
El ácido acetilsalicílico o AAS (C9H8O4), también conocido con el nombre de Aspirina®, es un fármaco de la familia de lossalicilatos, usado frecuentemente como antiinflamatorio, analgésico, para el alivio del dolor leve y moderado, antipirético para reducir la fiebre y antiagregante plaquetario indicado para personas con alto riesgo de coagulación sanguínea, principalmente individuos que ya han tenido un infarto agudo de miocardio.
La excreción se realiza a través de la orina y en mínimas cantidades por las heces. Amedida que la cantidad de aspirina administrada aumenta, la vida media de eliminación de su metabolito, el ácido salicílico, se incrementa desde 3-5 horas (dosis de 600 mg cada día) hasta 12-16 horas (dosis mayores de 3,6 g cada día).
La alcalinización de la orina aumenta la velocidad de excreción del ácido salicílico libre y sus conjugados hidrosolubles.
Los salicilatos y sus metabolitos seeliminan principalmente por vía renal, siendo excretada por la orina la mayor parte de la dosis. Aproximadamente el 75% de la dosis se encuentra en forma de ácido salicilúrico, mientras que el 15% está en forma de conjugados, sobre todo mono- y diglucurónidos. El 10% restante está constituido por salicilato libre. La orina aumenta la eliminación de salicilato, pero no la de otros metabolitos .Material:
MATERIAL CANTIDAD MATERIAL CANTIDAD
Micropipeta
Par de guantes
Probeta de 1000ml
Matraz aforado 25ml
Matraz aforado 50ml
Matraz aforado 10ml
Pipeta volumétrica 5ml
Pipeta volumétrica 2ml
Pipeta volumétrica 1ml
Pizeta 1
5
1
4
3
3
4
1
8
1 Probeta graduada 100ml
Tubos de ensaye de 13X120mm
Pipeta graduada 5ml
Pipeta pasteur con bulbo
Gradilla
Propipeta
Probeta de 1000mlVaso de precipitados de 4L 1
11
1
1
1
2
1
1

SUSTANCIAS CANTIDAD SUSTANCIAS CANTIDAD
Solución patrón de referencia de salicilato de sodio Cloruro mercúrico
Nitrato férrico
Ácido clorhídrico 20 g
20 g
30 ml

SOLUCIONES REACTIVOS
a) Reactivo de Trinder (para desarrollo de color) Pesar con exactitud 4g de Cloruro Mercúrico, colocarlos en un matraz volumétrico de 100 ml, añadir 12ml de solución 1N de ácido clorhídrico y disolver, ya disuelta la mezcla añadir 4 g de Nitrato Férrico pesados con exactitud, mezclar y diluir con agua destilada hasta el aforo.
NOTA: Preparar la cantidad necesaria para todo el grupo.
b) Solución patrón de referencia de salicilato de sodio. Pesar con exactitud 50 mg de salicilato de sodio y depositarlos en un matraz volumétrico de 50 ml, disolvertotalmente en 20 ml de orina libre de medicamento (diluida 1:10 con agua destilada) y llevar hasta el aforo con las misma orina.
Preparar 3 soluciones patrón a partir de 3 pasadas independientemente, así como 2 soluciones patrón, sustituyendo la orina por agua destilada.
Procedimiento:
1. Preparación de las muestras de validación:
Preparar 5 curvas patrón a partir de las soluciones anteriores(2 curvas preparadas en agua y 3 en orina) como se indica:

Alícuota de la sol patrón de salicilato de sodio 1000microg/ml (ml) Aforo en orina diluida o agua destilada (ml) Concentración (micogramos/ml)
5 10 500
5 25 200
2 25 80
1 25 40
1 50 20
5 10 10

2. Determinación de salicilatos en orina (Método analítico)
Procedimiento:
En un tubo de ensayo colocar 1ml de muestra y adicionar5ml del reactivo de Trinder para desarrollar color, agitar la muestra en vortex durante 1min y centrifugar, si es necesario, durante 5min a 3000 rpm para obtener una solución transparente, decantar la solución a otro tubo de ensaye y determinar la absorbancia a una longitud de onda de 540nm, ajustando a 0 un blanco de orina diluida (1:10) preparado a las mismas condiciones de la muestra.
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