Practica cinetica

Practica:
Efecto de pH en la actividad enzimática
Objetivo:
Comprobar el comportamiento de la enzima en presencia de diferentes pH
Introducción:
Sabiendo que las enzimas son proteínas,cualquier cambio brusco de pH puede alterar el carácter iónico de los grupos amino y carboxilo en la superficie proteica, afectando así las propiedades catalíticas de una enzima. A pH alto o bajo se puedeproducir la desnaturalización de la enzima y en consecuencia su inactivación. La fosfatasa ácida es más activa a pH 5,0, mientras que la fosfatasa alcalina lo es a pH 9,0. Muchas enzimas tienen máximaactividad cerca de la neutralidad en un rango de pH de 6 a 8.
Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de susaminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos pueden tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformación de las proteínas depende, en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pHen el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica (Figura de la derecha). Este es el llamado pH óptimo.
La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.Desviaciones de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente su actividad. Así, la pepsina gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasalo tiene a pH 10 (Figura de la izquierda). Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalización de la proteína, los seres vivos han desarrollado sistemas más o menos complejos para mantenerestable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiológicos.
Material y reactivos:
Material Reactivos
3 Manzanas Catecol mM
Espectofotometro Fosato monosodico NaH2PO4 / H2O
3 vasos de 10ml. HCl0.1M
10 tubos de ensaye para centrifuga
Centrifuga
1 Pipeta de 5ml.
1 Pipeta de 10ml.
1 Pipeta de 1 ml.
Perilla
Piseta
1 Matraz volumétrico de 100ml.

Metodología:
1. En el...