practica cromatografia alta resolucion
Páginas: 4 (851 palabras)
Publicado: 2 de marzo de 2014
Cromatografía líquida de alta resolución: HPLC
1.- FUNDAMENTO TEÓRICO
La cromatografía líquida de alta resolución (CLAR ó HPLC) es un método de separación que emplea un disolvente como fasemóvil a una presión elevada y constante (entre 500 y 5000 psi). La ventaja sobre la cromatografía líquida de elución por gravedad (columna clásica de relleno) es que la separación es muy rápida y elvolumen de muestra es muy pequeño. Además, se pueden separar muestras que no son volátiles o que se descomponen en un cromatografo de gases; por ello el HPLC es una técnica complementaria a lacromatografía gaseosa (CG).
La cromatografía líquida se lleva a cabo por inyección de la muestra (volúmenes del orden de los L) en una corriente de líquido, o fase móvil, que pasa a través de unacolumna empaquetada con pequeñas partículas llamada fase estacionaria. La separación de una mezcla en sus distintos componentes depende del diferente grado de retención de cada componente en la columna enfunción de la interacción con ambas fases.
En esta práctica se realizará un separación de sustancias por reparto ( cromatografía de reparto) en la cual la retención de las sustancias vendrádeterminada por la solubilidad relativa de las sustancias que componen la muestra entre ambas fases: estacionaria y móvil.
En este tipo de cromatografía se reparte el soluto entre la fase móvil yuna segunda fase consistente en un líquido inmiscible que recubre, o está asociado, a partículas sólidas de fase estacionaria. Los compuestos que se unen más fuertemente a la fase estacionaria seretienen más tiempo en la columna. Este tipo de cromatografía se denomina cromatografía de reparto en fase normal si la fase estacionaria es más polar que la móvil, y en fase inversa o reversa si lafase móvil es más polar que la estacionaria. Se habla de fase estacionaria enlazada si la fase estacionaria está químicamente unida al soporte sólido. Este es el tipo más común de cromatografía. Por...
1.- FUNDAMENTO TEÓRICO
La cromatografía líquida de alta resolución (CLAR ó HPLC) es un método de separación que emplea un disolvente como fasemóvil a una presión elevada y constante (entre 500 y 5000 psi). La ventaja sobre la cromatografía líquida de elución por gravedad (columna clásica de relleno) es que la separación es muy rápida y elvolumen de muestra es muy pequeño. Además, se pueden separar muestras que no son volátiles o que se descomponen en un cromatografo de gases; por ello el HPLC es una técnica complementaria a lacromatografía gaseosa (CG).
La cromatografía líquida se lleva a cabo por inyección de la muestra (volúmenes del orden de los L) en una corriente de líquido, o fase móvil, que pasa a través de unacolumna empaquetada con pequeñas partículas llamada fase estacionaria. La separación de una mezcla en sus distintos componentes depende del diferente grado de retención de cada componente en la columna enfunción de la interacción con ambas fases.
En esta práctica se realizará un separación de sustancias por reparto ( cromatografía de reparto) en la cual la retención de las sustancias vendrádeterminada por la solubilidad relativa de las sustancias que componen la muestra entre ambas fases: estacionaria y móvil.
En este tipo de cromatografía se reparte el soluto entre la fase móvil yuna segunda fase consistente en un líquido inmiscible que recubre, o está asociado, a partículas sólidas de fase estacionaria. Los compuestos que se unen más fuertemente a la fase estacionaria seretienen más tiempo en la columna. Este tipo de cromatografía se denomina cromatografía de reparto en fase normal si la fase estacionaria es más polar que la móvil, y en fase inversa o reversa si lafase móvil es más polar que la estacionaria. Se habla de fase estacionaria enlazada si la fase estacionaria está químicamente unida al soporte sólido. Este es el tipo más común de cromatografía. Por...
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