practica célular

Introducción:. En las células eucariontes, la síntesis de ATP acoplada a la cadena de transporte de electrones, fosforilación oxidativa, ocurre en la membrana interna de las mitocondrias.
Dichasíntesis de ATP depende de un proceso quimiosmótico. Los electrones de alta
energía de los hidrógenos del NADH y el FADH2 son cedidos a un compuesto con menor energía (alto potencial de reducción).
Laenergía liberada en su paso de un transportador a otro (pares rédox), es utilizada para bombear protones a través de la membrana interna desde la matriz mitocondrial al espacio intermembranal. Estogenera un gradiente electroquímico de protones a través de la membrana mitocondrial interna y aprovechando dicho gradiente, éstos vuelven a la matriz a través de la H+ATPsintasa que cataliza lafosforilación del ADP para dar ATP.
OBJETIVOS
Registrar el consumo de oxígeno en una muestra de mitocondrias aisladas y determinar los principales parámetros respiratorios.

Calcular la velocidad delconsumo de oxígeno en nmoles de O2 / ml / min (pendiente de las rectas).

Método:Encienda el interruptor principal del equipo (Oxímetro YSI, INCORPORATED, modelo 5300). Agregue 1 mL de agua a la celdadel oxígrafo que deberá estar en agitación. Espere 2 minutos para que la temperatura se estabilice a 30°C.
Coloque la perilla (A) en posición AIR. Espere a que marque 100%. Ajuste a 100% con laperilla de calibración (B). Si no puede ajustarse a 100% es posible que la membrana del electrodo esté rota o seca y deberá cambiarla.
Ajuste la concentración de oxígeno agregando cristales de ditionita.Encienda el graficador y ajústelo a: Output 1 Volt, Chart Speed 1cm/min, Zero: perilla en posición STBY.
Agregue 0.6 mL de medio de reacción en la celda del oxígrafo.
Calibre el oxígrafo a 100%con la perilla (A) AIR y al mismo tiempo ajuste la plumilla del graficador en la escala máxima. La velocidad de movimiento del papel dependerá de la rapidez en la liberación o consumo de O2....