Practica De Bioquimica

OBJETIVOS
1. Determinar fotocolorimétricamente la concentración de proteína en una solución problema, usando la curva estándar.
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son biopolímeros (macromoléculas orgánicas), de elevado peso molecular, constituidas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno; aunque pueden contener también azufre y fósforo. En menor proporción, hierro, cobre, magnesio,yodo, etc. Se agrupan para formar unidades estructurales (monómeros) llamados AMINOACIDOS. La estructura de un aminoácido está integrada por un carbono alfa, un grupo amino, un grupo carboxilo y una cadena de radicales.
Existen 20 aminoácidos diferentes que se combinan entre ellos de múltiples maneras para formar cada tipo de proteínas. Los aminoácidos pueden dividirse en 2 tipos: Aminoácidosesenciales que son 9 y que se obtienen de alimentos y aminoácidos no esenciales que son 11 y se producen en nuestro cuerpo.
Las proteínas poseen una estructura química central que consiste en una cadena lineal de aminoácidos plegada de forma que muestra una estructura tridimensional, esto les permite a las proteínas realizar sus funciones (1).
Según su composición, las proteínas se puedenclasificar en dos tipos que son proteínas simples o proteínas conjugadas.
* Proteínas simples: son aquellas que, por hidrolisis, producen solamente µ-aminoácidos.
* Proteínas conjugadas: Estas proteínas contienen además de su cadena polipeptídica un componente que no es un aminoácido, denominado grupo prostético. Este componente puede ser un ácido nucleico, un lípido, un azúcar o simplemente union inorgánico.
Según su forma, las proteínas se clasifican en dos tipos que son proteínas fibrosas y proteínas globulares.
* Si en un tipo de proteínas hay una dimensión mayor que las demás de dice que son proteínas fibrosas, además desempeña funciones estructurales.
* En las proteínas que son proteínas globulares su cadena polipeptídica se encuentra enrollada sobre sí misma y suestructura es esférica (1).
De acuerdo a los aminoácidos que la conformen y la estructura que adopte, la función de la proteína quedará definida desde su síntesis en los ribosomas.
Es importante señalar que el avance en el conocimiento de las proteínas ha conllevado a la par al conocimiento médico y la comprensión de enfermedades, las proteínas son prácticamente un campo lleno de futuro pues no fuesino hasta hace 20 años que inició la rama de la bioquímica conocida como proteómica; que se encarga de analizar la expresión, función y regulación del proteoma (Peretó, 2007). Para llevar a cabo sus fines, esta ciencia se basa en separar e identificar proteínas; su principal método es la electroforesis bidimensional, primero mediante un isoelectroenfoque por medio de un gel con gradiente de pHy luego en base a su masa molecular son aisladas mediante coloración de fluorescencia. Se comparan con una muestra patrón así como implementación de proteasas (2).
Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de rutina básica usada con múltiples propósitos. Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a)la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unirse a ciertos colorantes (Segal, 2005).
Un método muy utilizado en la ciencia para determinar las concentraciones de una solución, es la espectrofotometría que consiste en comparar la capacidad absorber o transmitir radiación que tiene unasolución con una concentración desconocida. Para esto, se vale del espectrofotómetro que es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un haz de Radiación Electromagnética (luz) que tiene la capacidad de facilitar la identificación, calificación y cuantificación de su energía. Su eficiencia, resolución, sensibilidad y rango espectral, dependerán de las variables de diseño y de la selección de...