Practica de citoquimica

PRACTICA 3

CITOQUIMICA

1. INTRODUCCION.-
La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica. (S. Woesner, 1990)
En una reacción bioquímica hay tres pasos fundamentales:
1.- Fijación:para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraldehído, formaldehído, etc.
2.- Incubación en el medio de reacción: como consecuencia seliberar unos productos que bien por si mismos, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reacción.
3.- Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma.
Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad. Las muestras aestudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea, improntas de tejidos y células impactadas mediante citocentrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes. Para la correcta valoración citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos. (S. Woesner, 1990)
2. OBJETIVOS.-

Objetivo general .-• Observar las sustancias químicas mas importantes y que forman parte de la estructura celular.
Objetivo espeficico.-
• Comprender la naturaleza de los distintos procesos fisiologicos que se observan durante el estudio de las celulas.

3. MATERIALES.-


• Cubre y portaobjetos
• Miscroscopio
• Lugol
• Reactivo de schiff
• Hematoxilina
• Agua oxigenada
• Agua sulfurosa
• Alcohol (96%)• Acido peryodico 0.5%
• Reactivo de nadi
• Sudan black
• Sudan III
• safranina
• Sapo o rana
• Tubérculo de papa
• Mani


4. METODOS O PROCEDIMIENTOS.-

Observacion de glucógeno : sobre un portaobjetos, hacer un extendido de hígado de sapo con ayuda de una aguja enmangada. Agregar una gota de lugol y esperar 15 minutos, luego enjuagar con agua y dejar secar. Observar conmicroscopio de inmersión.

Observacion de almidon: hacer un raspado de una papa sobre el centro de un portaobjetos, colocar sobre el raspado, una gota de lugol y tapar con un cubre. Observar al microscopio.

Grasas vegetales: realizar un raspado de mani sobre un portaobjetos, colocar una gota de sudan III, tapar con un cubre y observar.

Tecnica de PAS: sumergir cortes de hígado de sapo en elacido peryodico al 0.5% por 5 minutos. Lavar con agua destilada y colocar unas gotas de reactivo de schiff, dejar actuar por 15 minutos. Lavar con agua sulfurosa y luego con agua del grifo. Tenir con hematoxilina

Peroxidasas: realizar un extendido de sangre de sapo sobre un portaobjetos y dejar secar. Cubrirlo con una solución de sulfato de cobre al 0.5% . Agregar bencidina y luego agua oxigenada.Colocar safranina, dejar actuar 2 minutos y lavar. Observar.

Reaccion de feulgen: se hace un extendido de la sangre de sapo en un portaobjetos y se coloca en alcohol al 96% por 10 minutos y luego por alcohol al 70% y 50%, luego se enjuaga con agua destilada.
Se realiza una hidrólisis por un minuto en acido clorhídrico normal. Luego se agrega al porta el reactivo de schiff y se dejaactuar por una hora mas o menos. Lavar con agua sulfurosa 3 veces y luego con agua destilada, dejar secar. Observar.

5. RESULTADOS.-

Reactivo de fuelgen:


Eritrocitos de sapo

Peroxidasas:



Eritrocitos de sapo

Glucogeno:



Hígado de sapo

Almidon:



Papa

Grasas vegetales:...