Practica de colesterol

Objetivo:
Que el alumno aprenda a realizar correctamente la práctica de colesterol de los 3 tipos existentes e interpretar bien los resultados.

Introducción:
El colesterol es un esterol(lípido) que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma sanguíneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en el hígado, médula espinal, páncreas y cerebro. Pese a tenerconsecuencias perjudiciales en altas concentraciones, es esencial para crear la membrana plasmática que regula la entrada y salida de sustancias que atraviesan la célula.

Fundamento:
Las lipoproteínas demuy baja densidad (VLDL) y de baja densidad (LDL) presentes en la muestra, precipitan en presencia de fosfotungstato y iones magnesio. El sobrenadante contiene las lipoproteínas de elevada densidad(HDL), cuyo colesterol se cuantifica espectrofotométricamente mediante las reacciones acopladas descritas a continuación.

Colesterol esterificado + H2O Col. esterasaColesterol + Ácido graso
Colesterol + ½ O2 + H2O Col. oxidasa Colestenona + H2O2
2 H2O2 + 4 – Aminoantipirina + DCFS peroxidasaQuinonaimina + 4 H2O

Material:
• Centrífuga
• Baño de agua a 37ºC
• Analizador, espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 500 ± 20 nm
• Equipo vacutainer
• Tubo sin anticoagulanteProcedimiento:
Precipitación
1. Pipetear en un tubo de centrífuga
Muestra
0,2 mL
Reactivo (A)
0,5 mL

2. Agitar bien y dejar durante 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Centrifugar durante 10minutos a un mínimo de 4.000 r.p.m.
4. Recoger con cuidado el sobrenadante (Nota 2).

Colorimetría
5. Atemperar el Reactivo B a temperatura ambiente.
6. Pipetear en tubos de ensayo:

BlancoPatrón Muestra
Agua destilada 50 µL ---------- ---------
Patrón Colesterol HDL (S) --------- 50 µL ----------
Sobrenadante muestra ---------- --------- 50 µL
Reactivo (B) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL...