Practica de coliformes por nmp

MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

PRACTICA Núm. 17 COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN AGUA DE CONSUMO HUMANO

I. OBJETIVO Investigar la presencia de bacterias del grupo Coliforme en agua de consumo humano mediante la técnica del Número Más Probable (NMP), usando tubos de fermentación múltiple. II. INTRODUCCION La potabilidad del agua es de gran importancia en cuanto a Salud Pública,ya que ésta puede servir como vehículo de microorganismos patógenos, es decir, productores de enfermedades llamadas comúnmente "de origen hídrico" tales como Salmonelosis (Tifoidea y Paratifoidea), Shigelosis, Cólera, Hepatitis, etc. Estos microorganismos son todos de origen entérico. Se sabe que los microorganismos patógenos que llegan a los depósitos de agua, proceden de las descargasintestinales de hombres y animales. Además, ciertas especies de bacterias, particularmente Escherichia coli, y varios microorganismos similares, denominados coliformes, Estreptococos fecales (como Streptococcus faecalis) y Clostridium perfringens, son habitantes normales del intestino grueso de hombres y animales y en consecuencia siempre están en las materias fecales. Así pues, la presencia de cualquierade estas especies en el agua es evidencia de contaminación fecal y el camino está abierto a los patógenos ya que se encuentran en las materias fecales. La evaluación rutinaria del agua en busca de microorganismos patógenos, como Salmonella spp. y Shigella spp. puede ser difícil de realizar ya que el número de estas bacterias es relativamente escaso, por lo que se tiene que recurrir a pruebasbacteriológicas del agua potable que demuestren la presencia de microorganismos indicadores que siempre estén presentes en materia fecal, fácil de demostrar y que sirva de guía para conocer el grado de contaminación fecal. Surge así el concepto de "Indicador de contaminación fecal", el cual será utilizado para la valoración de la potabilidad bacteriológica de las aguas. De acuerdo con lo anterior, se haadoptado con carácter general, el "Grupo Coliforme" como indicador más digno de confianza.

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La OMS incluye dentro del grupo coliforme todos los bacilos aerobios y anaerobios facultativos Gram negativos, no esporulados, que producen ácido y gas al fermentar la lactosa, a 35 – 37 °C. Las especies clásicas de este grupo son Escherichia coli yEnterobacter aerogenes. El microorganismo indicador más comúnmente utilizado es Escherichia coli, considerando la OMS preferible emplear la expresión "Coliforme fecal" que comprende un número ligeramente mayor de variedades, todas ellas de claro origen fecal e indicadores de contaminación fecal reciente. Para los efectos del análisis sanitario del agua, se define el Coliforme fecal como un baciloaerobio o anaerobio facultativo, Gram negativo, no esporulado, que fermenta la lactosa con producción de ácido y gas a 44 °C (±0.5 °C) en menos de 24 horas. El método se basa en la inoculación de alícuotas de la muestra sin diluir que pueden ser volúmenes de 50, 10 y 1 mL, ó de 10, 1 y 0.1 mL, o diluida en caso necesario, en una serie de tubos por triplicado o quintuplicado con un medio quecontiene lactosa (caldo lactosado o caldo lauril triptosa). La valoración del contenido microbiano de una muestra de agua por el método del NMP supone la utilización de tablas numéricas que tienen en cuenta los volúmenes de agua y las cantidades de tubos sembrados en una ó más series. Realmente consiste en tratar estadísticamente el número de tubos de cada serie sembrada que resulten positivos despuésde su incubación. En cuanto a la investigación de patógenos en agua, no existe un método único que permita aislar e identificar todos estos microorganismos. En general, los métodos con los que se obtienen mejores resultados comprenden una fase de concentración, seguida de técnicas de enriquecimiento y aislamiento específicas para cada microorganismo. El procedimiento para la recolección de las...