Practica De Extraccion De Espinaca

Nombre: Osvaldo Homero Cruz Rivera CLAVE: 12/08
Fecha: 22/05/12 Practica No.31
Titulo de la práctica:Extracción de ADN de la espinaca.
Objetivo: Extraer el ADN de las células de la espinaca.
Investigación: Explica una técnica para extracción de ADN de células sanguíneas en un laboratorio de biologíamolecular.
1. Extraer 3 ml de sangre periférica y colocarlos en tubo de 13 x 100 con EDTA al 10%. Posteriormente se transfiere la sangre a tubos de Falcon de 10 ml y se adicionan 3 ml de TTS(tris-tritón-sacarosa)
2. Se centrífuga a 3000 r.p.m. durante 10 min.
3. Se decanta el sobrenadante a un vaso con color (desechar). Este es un punto muy importante puesto que en el fondo queda un botón espesoque no se debe perder al decantar.
4. Agregar al botón 1ml de TTS y transferirlo a un tubo Eppendorf de 1.5 ml, homogeneizar fuerte (con la mano o con un vortex con disco agitador para tubosEppendorf) hasta disolver el botón y centrifugar a 12 000 r. p. m. Durante dos minutos a 4°C.
5. decantar el sobrenadante y agregar 1 ml más de TTS y otra vez disolver el botón y centrifugar otros dosminutos a 4°C . (este paso se tiene que repetir hasta que se obtenga un botón blanco y también el sobrenadante).
6. Una vez que se haya decantado el sobrenadante blanco y da un botón blanquecino se agregan570 ðl de NaCl 5mM y homogeneizar dos minutos (aquí no se decanta) + 30 ðl de SDS al 10% y homogeneizar diez minutos + 200 ðl de NaCl saturado y homogeneizar 15 minutos.
7. una vez que se hayarealizado esta mezcla se centrífuga a 12, 000 rpm durante 25 minutos a 4°C. Mientras transcurre este tiempo se puede ir preparando tubos estériles de 13x100 con 2 ml (se puede utilizar tubos Falconestériles) de etanol absoluto frío, para que una vez que terminen los 25 minutos se vierta el sobrenadante en el etanol absoluto, una vez que esto se haya hecho mezclar suavemente el tubo que contiene el...