Practica De Fermentacion Bioquimica
Páginas: 11 (2711 palabras)
Publicado: 8 de mayo de 2012
HIPÓTESIS
* Si la fermentación llevada a cabo por Saccharomyces cerevisiae es una fermentación alcohólica entonces tendrá como productos el Etanol y liberación de CO2.
* Si hay un correcto empleo de la técnica entonces se podrán conocer los valores de eficiencia de dicha fermentación a través del análisis del balance de fermentación.
* Si hay condiciones estrictas de anaerobiosisentonces el proceso de fermentación de lleva a cabo habiendo generación de sus productos
DISEÑO EXPERIMENTAL
Durante esta práctica se decidió utilizar 3 diferentes tipos de modelos experimentales para la evaluación de la producción y eficiencia de la fermentación alcohólica.
Estos métodos utilizados fueron la cuantificación de glucosa por DNS, la técnica de microdifusión en cámaras de Conway yun método gravimétrico para la cuantificación de CO2
La determinación de glucosa residual se llevo a cabo por el método del Ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), esta técnica se basa en la reducción de DNS (color amarillo) por la glucosa al Ácido 3-amino-5-dinitrosalicílico (color rojizo) previo calentamiento a ebullición durante 10 minutos y cuya presencia se detecto por la lectura de laabsorbancia se detectó en un espectrofotómetro determinada por una curva tipo de una solución patrón de glucosa.
Este método esta basado en la siguiente reacción:
El siguiente método utilizado fue la microdifusión en cámaras de Conway, las cuales esta constituidas por dos compartimentos (externo y central).
En el compartimento externo se colocara nuestra muestra y el agente liberador, que en estecaso será el K2CO3, mientras que en el compartimento central se colocara el agente atrapante K2Cr2O7 en H2SO4.
Las reacciones que se llevan a cabo son las siguientes:
Compartimento externo:
K2CO3 + H2O CO2 + 2KOH
K2CO3 + H2O + 2K2Cr2O7 + 2H2SO4 +6CH3CH2OH 2KOH + CO2 + 2K2SO4 + 6CH3CHO + Cr2O3 + H2O
Compartimento central :
K2Cr2O7 + H2SO4 +3CH3CH2OH K2SO4 + 3CH3COOh + Cr2O3
En este caso se produce la captación y oxidación del Etanol hacia Ácido acético, forzándose la remoción completa del este alcohol al cabo de un tiempo determinado que en nuestro caso fue 30 minutos quedando este en la cámara central y se llevara a cabo una determinación posterior para conocer la cantidad de etanol presente por medio deotra curva tipo.
Por ultimo se llevo a cabo una técnica gravimétrica para la cuantificación de CO2 generado durante el proceso fermentativo, la cual se baso en el uso del BaCl2 el cual es el agente precipitante utilizado en esta cuantificación y el cual debe estar libre de CO2 ya que si no es así generaría interferencias en el proceso.
Las reacciones llevadas a cabo en este proceso deprecipitación y cuantificación son las siguientes:
2NaOH + CO2 NaHCO3
2NaHCO3 + BaCl2 BaCO3 + 2NaCl + H2
Se generara un precipitado blanco sobre la superficie del papel filtro utilizado para la separación de la solución que lo contenida el cual es el BaCO3 y será este el que se cuantificara a través de cálculos que involucran a un factor gravimétrico
OBJETIVOS
*Se realizara la fermentación alcohólica realizada por Saccharomyces cerevisiae.
* Se realizaran los cálculos correspondientes para determinar un balance de fermentación y balance oxido-reducción.
* Evaluaremos el balance de Saccharomyces cerevisiae a partir de los productos obtenidos por medio de la fermentación alcohólica:
* Por el método de Conway cuantificaremos etanol.
*Por el método del DNS cuantificaremos la glucosa residual.
* Por el método de gravimetría cuantificaremos CO2.
REGISTRO DE DATOS
Tabla No. 1 Curva tipo de etanol
g de etanol | Absorbencia a 445nm |
0 | 1.112 |
500 | 1.019 |
1000 | 0.824 |
1500 | 0.708 |
2000 | 0.517 |
2500 | 0.299 |
Tabla No. 2 Obtención de absorbancias de etanol formado en la fermentación por el...
* Si la fermentación llevada a cabo por Saccharomyces cerevisiae es una fermentación alcohólica entonces tendrá como productos el Etanol y liberación de CO2.
* Si hay un correcto empleo de la técnica entonces se podrán conocer los valores de eficiencia de dicha fermentación a través del análisis del balance de fermentación.
* Si hay condiciones estrictas de anaerobiosisentonces el proceso de fermentación de lleva a cabo habiendo generación de sus productos
DISEÑO EXPERIMENTAL
Durante esta práctica se decidió utilizar 3 diferentes tipos de modelos experimentales para la evaluación de la producción y eficiencia de la fermentación alcohólica.
Estos métodos utilizados fueron la cuantificación de glucosa por DNS, la técnica de microdifusión en cámaras de Conway yun método gravimétrico para la cuantificación de CO2
La determinación de glucosa residual se llevo a cabo por el método del Ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS), esta técnica se basa en la reducción de DNS (color amarillo) por la glucosa al Ácido 3-amino-5-dinitrosalicílico (color rojizo) previo calentamiento a ebullición durante 10 minutos y cuya presencia se detecto por la lectura de laabsorbancia se detectó en un espectrofotómetro determinada por una curva tipo de una solución patrón de glucosa.
Este método esta basado en la siguiente reacción:
El siguiente método utilizado fue la microdifusión en cámaras de Conway, las cuales esta constituidas por dos compartimentos (externo y central).
En el compartimento externo se colocara nuestra muestra y el agente liberador, que en estecaso será el K2CO3, mientras que en el compartimento central se colocara el agente atrapante K2Cr2O7 en H2SO4.
Las reacciones que se llevan a cabo son las siguientes:
Compartimento externo:
K2CO3 + H2O CO2 + 2KOH
K2CO3 + H2O + 2K2Cr2O7 + 2H2SO4 +6CH3CH2OH 2KOH + CO2 + 2K2SO4 + 6CH3CHO + Cr2O3 + H2O
Compartimento central :
K2Cr2O7 + H2SO4 +3CH3CH2OH K2SO4 + 3CH3COOh + Cr2O3
En este caso se produce la captación y oxidación del Etanol hacia Ácido acético, forzándose la remoción completa del este alcohol al cabo de un tiempo determinado que en nuestro caso fue 30 minutos quedando este en la cámara central y se llevara a cabo una determinación posterior para conocer la cantidad de etanol presente por medio deotra curva tipo.
Por ultimo se llevo a cabo una técnica gravimétrica para la cuantificación de CO2 generado durante el proceso fermentativo, la cual se baso en el uso del BaCl2 el cual es el agente precipitante utilizado en esta cuantificación y el cual debe estar libre de CO2 ya que si no es así generaría interferencias en el proceso.
Las reacciones llevadas a cabo en este proceso deprecipitación y cuantificación son las siguientes:
2NaOH + CO2 NaHCO3
2NaHCO3 + BaCl2 BaCO3 + 2NaCl + H2
Se generara un precipitado blanco sobre la superficie del papel filtro utilizado para la separación de la solución que lo contenida el cual es el BaCO3 y será este el que se cuantificara a través de cálculos que involucran a un factor gravimétrico
OBJETIVOS
*Se realizara la fermentación alcohólica realizada por Saccharomyces cerevisiae.
* Se realizaran los cálculos correspondientes para determinar un balance de fermentación y balance oxido-reducción.
* Evaluaremos el balance de Saccharomyces cerevisiae a partir de los productos obtenidos por medio de la fermentación alcohólica:
* Por el método de Conway cuantificaremos etanol.
*Por el método del DNS cuantificaremos la glucosa residual.
* Por el método de gravimetría cuantificaremos CO2.
REGISTRO DE DATOS
Tabla No. 1 Curva tipo de etanol
g de etanol | Absorbencia a 445nm |
0 | 1.112 |
500 | 1.019 |
1000 | 0.824 |
1500 | 0.708 |
2000 | 0.517 |
2500 | 0.299 |
Tabla No. 2 Obtención de absorbancias de etanol formado en la fermentación por el...
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