Practica de laboratorio
Objetivo:
Evidenciar las estructuras de resistencia o esporas del genero bacillus sp
Fundamento teórico:
Las esporas bacterianas poseen unas cubiertasexclusivas que las hacen resistentes a los factores ambientales adversos. Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de difíciltinción. En general las esporas se tiñen muy difícilmente necesitando colorantes muy concentrados y su fijación con calor.
La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:
1.- Verde malaquita:capaz de teñir las esporas
2.- Safranina: colorante de contraste que tiñe las bacterias
Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo haránlas formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.
Procedimiento
1. Preparar los frotis
2. Teñir con verde malaquita. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encimade la llama del mechero para que el colorante se evapore, pero sin que hierva, durante 5 min. Añadir más colorante si la muestra se seca.
3. Lavar con agua el resto de colorante.
4. Teñircon safranina 1 min.
5. Lavar con agua el resto de colorante.
6. Secar la preparación.
7. Observar la preparación al microscopio.
Material utilizado:
* Microscopio
* Portaobjetos* Asa de siembra
* Cristalizador
* Cultivo bacteriano: bacillus sp
* Barras paralelas
* Pinzas
* Frasco lavador
* Mechero de alcohol
* Papel de filtro
* VerdeMalaquita
* Safranina
Conclusiones
Hemos podido observar las esporas se han teñido de verde y las bacterias de rojo.
Hemos calentado el verde de malaquita sin dejar que se llegara a secar deltodo y evitando que se queme pero llegando al desprendimiento de vapores por que asi el colorante penetra mas en las esporas puesto que son muy difíciles de teñir y por lo tanto se fija mejor de...
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