Practica De Metodo De Kunitz

INTRODUCCIÓN

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción química que es energéticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja, sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimasactúan sobre unas moléculas denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas productos. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina reacciones enzimáticasLas enzimas proteoliticas o proteasas son un grupo de enzimas que descompone en unidades maspequeñas las proteínas.
Estas rompen la cadena larga de moléculas que forman las proteínas formando fragmentos más cortos llamados péptidos que son moléculas formadas por aminoácidos. Están presentes en bacterias y plantas pero son mas abundandantes en los animales. Las enzimas proteolíticas o proteasas se denominan también proteinasas.
Las proteasas se producen de manera natural en el organismo yconstituyen entre el 1% y el 5% del contenido genético. Estas enzimas juegan en la descomposición de largas cadenas proteicas en fragmentos cortos partiendo el enlace peptídico que une dos aminoácidos, asi como también determinan el tiempo de vida de otras proteínas que juegan un papel fisiológico importante como son las hormonas, los anticuerpos u otras enzimas.
Mediante complejas accionescooperativas las proteasas o enzimas proteoliticas pueden crear reacciones en cascada lo cual produce un rápida y eficaz respuesta amplificada a una señal fisiológica del organismo como signo anunciador de una enfermedad. Aunque el cuerpo humano produce estas enzimas en el páncreas algunos alimentos contienen enzimas proteoliticas. La papaya y la pina son dos ricas fuentes de estas enzimas. Lapapaina y la bromelina son los nombres respectivos de las enzimas proteoliticas que se encuentran en esas frutas.

Este método es uno de los más utilizados para la determinación de actividad enzimática de proteínas proteolíticas, que se basa en la medición de la cantidad de aminoácidos y péptidos solubles liberados por la hidrólisis de la caseína por proteínas proteóliticas, en este caso bromelaína ypapaína, a partir de la actividad enzimática de la tripsina, con un paralizado previo de la reacción con una solución de TCA para precipitar proteínas, aprovechando la capacidad de algunos aminoácidos de tener un pico máximo de absorción a 280nm.

OBJETIVOS

* Elaborar una curva estándar de actividad enzimática.
* Determinar la actividad proteolítica de la bromelaína y papaína.
*Analizar que enzima tiene mejor actividad enzimática.

DATOS EXPERIMENTALES

Tabla 1.- Actividad enzimática de la tripsina.
Tubo | Concentración de tripsina (mg/ml) | A 280 | A 280 corregida |
| | Problema | Testigo | |
T1 y 1 | 0.04 | 0.297 | 0.116 | 0.181 |
T2 y 2 | 0.08 | 0.477 | 0.117 | 0.360 |
T3 y 3 | 0.12 | 0.620 | 0.112 | 0.508 |
T4 y 4 | 0.16 | 0.791 | 0.104 |0.687 |
T5 y 5 | 0.20 | 1.136 | 0.110 | 1.026 |
PROBLEMAS |
TI y I | Bromelaína 1:10 | 1.432 | 0.256 | 1.176 |
TII y II | Bromelaína 1:20 | 0.730 | 0.189 | 0.541 |
TIII y III | Papaína | 0.346 | 0.138 | 0.208 |

No se toma en cuenta por salirse de la línea de tendencia.

0.687 – 0.181
m= ------------------------------
0.16 – 0.04Y2-y1
m = -----------------
x2- x1
¿Cuántas unidades trípticas hay por miligramo de tripsina?
m= | 4.21666667 |
| |



UT= | 0.21083333 |



UT | 0.21083333 |
UT= m/20= 4.22/20 = 0.21

Tabla 2.- Actividad enzimática específica para la digestión de caseína por tripsina.
Tubo | Unidades trípticas | A 280 corregida |
1 | 0.00843333 |...