practica de Mitosis
Páginas: 8 (1763 palabras)
Publicado: 7 de noviembre de 2013
>INTRODUCCION
Las características de un organismo están especificadas en su información genética, la cual está representada como una secuencia de ácidos nucleicos, donde la suma total de esta secuencia es lo que conforma su genoma.
Quizás de los procedimientos en biología molecular, el más básico es la purificación de ácidos nucleicos, por lo tanto se requieren métodos seguros para laseparación de estos componentes de las células. Para lograr esto, se utilizan diversos métodos de extracción dependiendo del tipo de tejido a emplear, fresco, seco o congelado.
En términos generales la separación del DNA de los componentes celulares puede ser dividida en cuatro etapas:
a) Disrupción o alteración de la membrana
b) Lisis
c) Remoción de proteínas y contaminantes
d) Recuperación del DNALos pasos a y b son combinados. Se emplea el citrato de sodio ya que atrapa los iones (Mg²⁺ y Ca ²⁺, útiles para la correcta actividad de las enzimas degradadoras) e impide que degraden las macromoléculas de interés. Posteriormente se adiciona la solución homogeneizadora que disgrega el tejido de la fresa y rompe las células para obtener el material genético, todo esto, mientras se macera.
Laremoción de proteínas y contaminantes (como el tejido de la fruta y los organelos destruidos) ocurre mediante la filtración de la mezcla obtenida, de esta manera, se obtienen dos fases, la inferior cuyo contenido es el tejido macerado junto con los desechos celulares, mientras que la superior contuvo el material genético.
La recuperación del ADN fue acontecida con la adición de Etanol, ya que ésteconcentra los ácidos nucleicos mediante precipitación. Los resultados obtenidos demuestran que la mayor cantidad de ADN en mg/mL se encuentra en el hígado de pollo, y por ende, muestra una pureza mucho más alta que el de la fresa.
El ADN purificado por medio de este proceso, está listo para ser utilizado en diferentes aplicaciones, las cuales involucran: amplificaciones (PCR), digestión conendonucleasas de restricción, Southern blot y Dot blot. Aunque no alojarán resultados exactos, debido a que la pureza muestra un gran intervalo de desviación respecto a la medida patrón al considerar la pureza adecuada
Ademas existen diferentes métodos para la recuperación del DNA, los más comunes son: Salting-Out, extracción orgánica con fenol- cloroformo, gradientes de densidad de cloruro de cesio,métodos basados en sílica-gel o resina quelante (Chelex).
OBJETIVO
Extraer ADN de tejidos de origen vegetal que en este cao se hizo uso de la fresa, y animal, donde se utilizo hígado de pollo, además de cuantificar el ADN mediante la técnica espectrofotométrica
DESCRIPCIÓN DEL EXPERIMENTO
ACTIVIDAD 1. EXTRACCION DEL ADN
1. Se enjuago con agua destilada estéril las fresas y los hígados depollo antes de procesarlos.
2. Se usaron guantes de látex y con ayuda del bisturí, se cortó en fragmentos pequeños los 25 g de fresas e hígado en diferentes cajas de Petri estériles.
3. Se colocaron los fragmentos de tejidos en el mortero pre-congelado y este, a su vez, en el baño de hielo con 20 mL de acetona y 5g de sal en grano.
4. Se adicionaron 10 mL de la solución de citrato de sodio y semacero hasta obtener una mezcla homogénea.
5. Se adicionaron 75 mL de solución homogeneizadora al mortero, se macero durante 15 min posteriormente se adicionaron otros 75 mL de solución homogeneizadora y se continuó macerando durante 15 min.
6. Se filtró el homogenizado en un embudo a través de 6 capas de gasa
7. Se filtro por segunda vez el homogeneizado a través de 6 capas de gasa
8. Secomprimió la gasa para recuperar la mayor cantidad de liquido
9. Se transfirio el filtrado a una probeta de 250 mL y se esperó a que se sedimentaran las proteínas y que en la parte superior se concentrara el material genético
10. Se midió el volumen de material genético que se obtuvo
11. Se transfirió el material genético a un vaso de precipitado de 250 mL
12. Se le agrego un volumen igual de...
Las características de un organismo están especificadas en su información genética, la cual está representada como una secuencia de ácidos nucleicos, donde la suma total de esta secuencia es lo que conforma su genoma.
Quizás de los procedimientos en biología molecular, el más básico es la purificación de ácidos nucleicos, por lo tanto se requieren métodos seguros para laseparación de estos componentes de las células. Para lograr esto, se utilizan diversos métodos de extracción dependiendo del tipo de tejido a emplear, fresco, seco o congelado.
En términos generales la separación del DNA de los componentes celulares puede ser dividida en cuatro etapas:
a) Disrupción o alteración de la membrana
b) Lisis
c) Remoción de proteínas y contaminantes
d) Recuperación del DNALos pasos a y b son combinados. Se emplea el citrato de sodio ya que atrapa los iones (Mg²⁺ y Ca ²⁺, útiles para la correcta actividad de las enzimas degradadoras) e impide que degraden las macromoléculas de interés. Posteriormente se adiciona la solución homogeneizadora que disgrega el tejido de la fresa y rompe las células para obtener el material genético, todo esto, mientras se macera.
Laremoción de proteínas y contaminantes (como el tejido de la fruta y los organelos destruidos) ocurre mediante la filtración de la mezcla obtenida, de esta manera, se obtienen dos fases, la inferior cuyo contenido es el tejido macerado junto con los desechos celulares, mientras que la superior contuvo el material genético.
La recuperación del ADN fue acontecida con la adición de Etanol, ya que ésteconcentra los ácidos nucleicos mediante precipitación. Los resultados obtenidos demuestran que la mayor cantidad de ADN en mg/mL se encuentra en el hígado de pollo, y por ende, muestra una pureza mucho más alta que el de la fresa.
El ADN purificado por medio de este proceso, está listo para ser utilizado en diferentes aplicaciones, las cuales involucran: amplificaciones (PCR), digestión conendonucleasas de restricción, Southern blot y Dot blot. Aunque no alojarán resultados exactos, debido a que la pureza muestra un gran intervalo de desviación respecto a la medida patrón al considerar la pureza adecuada
Ademas existen diferentes métodos para la recuperación del DNA, los más comunes son: Salting-Out, extracción orgánica con fenol- cloroformo, gradientes de densidad de cloruro de cesio,métodos basados en sílica-gel o resina quelante (Chelex).
OBJETIVO
Extraer ADN de tejidos de origen vegetal que en este cao se hizo uso de la fresa, y animal, donde se utilizo hígado de pollo, además de cuantificar el ADN mediante la técnica espectrofotométrica
DESCRIPCIÓN DEL EXPERIMENTO
ACTIVIDAD 1. EXTRACCION DEL ADN
1. Se enjuago con agua destilada estéril las fresas y los hígados depollo antes de procesarlos.
2. Se usaron guantes de látex y con ayuda del bisturí, se cortó en fragmentos pequeños los 25 g de fresas e hígado en diferentes cajas de Petri estériles.
3. Se colocaron los fragmentos de tejidos en el mortero pre-congelado y este, a su vez, en el baño de hielo con 20 mL de acetona y 5g de sal en grano.
4. Se adicionaron 10 mL de la solución de citrato de sodio y semacero hasta obtener una mezcla homogénea.
5. Se adicionaron 75 mL de solución homogeneizadora al mortero, se macero durante 15 min posteriormente se adicionaron otros 75 mL de solución homogeneizadora y se continuó macerando durante 15 min.
6. Se filtró el homogenizado en un embudo a través de 6 capas de gasa
7. Se filtro por segunda vez el homogeneizado a través de 6 capas de gasa
8. Secomprimió la gasa para recuperar la mayor cantidad de liquido
9. Se transfirio el filtrado a una probeta de 250 mL y se esperó a que se sedimentaran las proteínas y que en la parte superior se concentrara el material genético
10. Se midió el volumen de material genético que se obtuvo
11. Se transfirió el material genético a un vaso de precipitado de 250 mL
12. Se le agrego un volumen igual de...
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