Practica De Propiedades De Aminoacidos

PRACTICA No. 4
ALGUNAS PROPIEDADES FISICAS DE LAS PROTEINAS

INTRODUCCIÓN
Las proteínas son polímeros lineales de aminoácidos, que se pliegan en una notable diversidad de formas tridimensionales proporcionándoles una correspondiente variedad de funciones. Son componentes esenciales de todas las células vivas y su misión en el organismo puede ser de tipo estructural o de tipo funcional(Teijón y Garrido, 2006). Las proteínas que se encuentran en cualquiera de sus conformaciones (estructura primaria, secundaria, terciaria o cuaternaria) se denominan proteínas nativas, siendo ésta la forma de plegamiento más estable para la molécula. Por otro lado, determinar el punto isoeléctrico de una proteína resulta de vital importancia para comprender el comportamiento de las mismas en elorganismo bajo distintos cambios de pH. El propósito de esta práctica es demostrar por medio de cambios de temperatura, pH y uso de desestabilizantes químicos el proceso de desnaturalización proteica y cómo este proceso influye con la pérdida de función biológica de la proteína, además de determinar experimentalmente el punto isoeléctrico de la caseína.
METODOLOGÍA
Se determinó el punto isoeléctricode la caseína por medio de la preparación de tres series de nueve tubos con una solución diferente de caseína con acetato de sodio y ácido acético (serie 1), Sulfato de Cobre (serie 2) y Wolframato de sodio (serie 3) tomando en cuenta la cantidad de precipitado obtenido en cada serie para inferir el efecto del pH en cada una antes y después del punto isoeléctrico de la proteína. Por otro lado,se llevó a cabo la desnaturalización de albúmina por cambio de pH utilizando NaOH y ácido acético; así como de la caseína utilizando HCl concentrado, NaCl y NaOH 6N. Por último se analizó la desnaturalización de la α-Amilasa mediante la adición de HCl comparando los resultados con muestras a las que no se les agregó HCl para analizar la pérdida de función biológica.

RESULTADOS
Grafica No. 1:determinación del punto isoeléctrico de la caseína.

Verde: acido acético
Azul: sulfato de cobre
Rojo: wolframato de sodio
Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioquímica, Edificio T-12, USAC.

En la grafica numero 1, en la cual el eje x corresponde al pH y el eje y a la solubilidad, se puede observar el punto isoeléctrico obtenido de forma experimental de la caseínael cual tiene un valor de pH de 4.2.

Tabla No.1: Demostración de la función de la α-Amilasa mediante la hidrolisis del almidón.
Tiempo | Color |
0 min5 min10 min15 min20 min | XXXXX |
Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioquímica, Edificio T-12, USAC.
El número de (X) hace referencia a que el color violeta se mantuvo durante todo el procedimiento.

TablaNo.2: Demostración de la pérdida de función biológica de la α-Amilasa mediante la desnaturalización con HCl concentrado.
Tiempo | color |
0 min5 min10 min15 min | XXXX |

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioquímica, Edificio T-12, USAC.
Se puede observar que en un intervalo de tiempo de cero minutos a quince minutos agregando HCl concentrado la α-Amilasa aunpresenta función biológica.

Tabla No. 3: Desnaturalización de la Caseína y de la ovoalbúmina mediante la utilización de diferentes agentes físico-químicos.
proteína | agente | Coagulo |
caseína | NaCl | X |
caseína | NaOH | 0 |
caseína | HCl [] | X |
caseína | Calor | 0 |
albúmina | calor y HCl | X |
albúmina | control | 0 |
Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio deBioquímica, Edificio T-12, USAC.
En la tabla numero 3 se puede observar que la caseína presenta coagulación con los diferentes agentes utilizados, a diferencia de la caseína control que no presenta coagulación. La proteína albúmina presento coagulación al utilizar como agente HCl y calor. En este caso el numero de (X) representan la presencia o ausencia de coagulo en la solución.

Tabla...